豇豆胰蛋白酶抑制剂不同组分的制备方法

2012-12-23金宪雷张泉霖杜林方

天然产物研究与开发 2012年1期

关键词：方法

金宪雷，张泉霖，杜林方，刘科

四川大学生命科学学院，成都610064

在正常的细胞代谢中，蛋白酶抑制剂扮演着重要的角色。蛋白酶抑制剂构成了控制蛋白酶活性的最后的调节步骤。在生理调节中，蛋白酶抑制剂和蛋白酶达到一个动态的生物平衡［1，2］。Read 和Haas 第一次证明，豆粉中含有只能抑制胰蛋白酶活性的蛋白(STI)和能同时抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的蛋白(BBI)［3］。在过去的二十多年间，人们普遍认为，BBI 是一种抗营养的物质。BBI 类的胰蛋白酶抑制剂，会在叶子受伤后表达分泌，是一种天然的抗虫物质［4］，目前已经在转基因抗虫领域得到广泛的应用［5］。近年来，体外实验已经证实，单独的BBI 类的胰蛋白酶抑制剂是一种抗癌症的物质，在纳摩尔含量下即起效，并对癌症细胞有不可逆的作用［6，7］。因此，寻找及利用胰蛋白酶抑制剂是极具研究价值的。豆科(Leguminosae)豇豆属(Vigna)植物豇豆，是一种优质的蛋白质资源。Sammour 等人证明豇豆中含有四种胰蛋白酶抑制剂(Cowpea trypsin inhibitor，CPTI)［8］，本文探讨了豇豆中不同组分的制备方法。

1 材料和方法

1.1 材料

豇豆(Vigna unguiculata var.)种子购自市场;中分子量标准蛋白、丙烯酰胺(Acr)为Sigma 产品;牛胰蛋白酶(Bovine Trypsin)、Na-苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯胺盐酸盐(BAPAN)、甲叉双丙烯酰胺(Bis)为Fluka 产品;葡聚糖凝胶(Sephadex G-150)为Phamarcia 公司产品;DEAE-52 纤维素为Whatman 公司产品;Sephacryl s-300 凝胶过滤柱为GE 公司产品;牛血清白蛋白(BSA)，为上海丽珠公司产品;其余试剂均为国产分析纯。