上海浩源生物科技有限公司 疏 翠 安 顺

人类微小病毒B19（Human parvovirus B19，HPV B19）是儿科常见的出疹性疾病——传染性红斑（又称第五病，Erythema infection，EI）的病因。除了这一轻型自限性感染外，B19 病毒还可使慢性溶血病病人发生再障危象及急性多关节病。在免疫缺损病人中可造成持续性感染。由于细小病毒B19致病的广泛性和复杂性，目前国际上对该病毒的研究比较活跃。B19 可通过呼吸道传播，也可通过输血和使用血液制品传播，从而引起多种疾病。B19病毒的近期感染主要通过IgM抗体的检测，常用捕获法或放射免疫测定，IgG 抗体对诊断急性感染无意义，其存在仅表明曾感染过，主要用于血清流行病学调查。目前实验室和临床检测中，最敏感检测病毒的方法是PCR法，通过对B19进行实时荧光定量PCR检测，能突破窗口期的局限性，更利于B19 病毒的早期诊断和治疗。本文，笔者根据荧光定量PCR的原理建立了人类细小病毒B19的实时荧光定量PCR检测方法，经过对临床样本的检测，显示建立的方法敏感性高，特异性好，适合B19病毒的筛查和核酸定量检测。

一、材料与方法

1.标本来源。WHO B19 标准品购自英国国家生物制品检定所（NIBSC）。单纯疱疹病毒样本、巨细胞病毒样本、带状疱疹病毒样本、T细胞白血病病毒样本、腺病毒样本、呼吸道合胞病毒样本、流感病毒样本和副流感病毒样本来自上海地区医院。89份临床样本为血液中心献血员血浆留样中筛检到的B19阳性样本。

2.试剂和仪器。DNA 提取采用上海浩源磁珠提取试剂盒，dNTP（dATP、dCTP、dGTP、dUTP、dTTP）和Tris 为宏锦公司采购，尿嘧啶糖基化酶（UNG）为roche 公司产品、热启动TaqDNA 聚合酶购自Fermentas 公司。……