赵永福

河南林州市人民医院 林州 456500

脑血管疾病的发病率和病死率在国内、外均名列前茅。在我国，其发病率是心肌梗死的5倍。脑质量仅为体质量的2%，但其耗氧量则占全身耗氧量的20%，其所需血供占心输出量的15%。加之脑组织不能储存能量，也不能进行糖的无氧酵解，因此其对氧和血供的要求特别高，当脑缺血发生时大量的神经细胞凋亡造成不可逆的损伤，为了能够了解依达拉奉对神经细胞的保护作用，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料 实验目标为出生24h内SD 乳鼠，去双侧大脑皮质，以胰蛋白酶制成单细胞悬混液，加培养基调节细胞浓度为每升105级数后，在培养瓶内接种，孵育在二氧化碳培养箱，3d后经阿糖胞苷培养基进行换液，控制纤维细胞与神经胶质细胞的生长，第6天再次进行培养基换液，第7天取出盖玻片，以说明书进行操作，完成镜下观察。

1.2 分组 分为正常对照组、药物损伤组、低浓度异丙酚组（1mg／L）、中浓度异丙酚组（3 mg／L）、高浓度异丙酚组（5 mg／L）、依达拉奉组。6组中除正常对照组外，均在第7天去掉培养基，分别加入相应浓度的异丙酚培养基与浓度为100 μmol／L的依达拉奉培养基，再培养24h。

1.3 建立GLU 毒性模型［1］在第8天将原培养基去掉，除对照组外均加入浓度为200μmol／L 的Glu 培养基后30 min，以D-Hank溶液冲洗后，以10%胎牛血清培养基再次培养24h。

1.4 观察指标 在培养第9天分别检测各组的指标，包括神经细胞存活率、LDH 的漏出率、细胞凋亡率等，进行统计学分析［2］。

1.5 统计学方法 检验指标资料的数据采用SPSS 13.0统计学软件分析，计量资料以（±s）表示，组间进行t检验，计数资料以χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

各组神经细胞存活率、LDH 漏出率、细胞凋亡率比较，见表1。依达拉奉组与正常对照组相比存活率无显著下降，差异无统计学意义（P＞0.05），正常对照组相其他损伤组细胞存活率比较显著下降（P＜0.05）。LDH 漏出率，药物损伤组相比正常对照组显著升高（P＜0.05），其他各组检出率也显著升高（P＜0.05），与药物损伤组相比异丙酚中浓度组与依达拉奉组明显较低（P＜0.05），其他2组降低不明显（P＞0.05）。细胞凋亡率观察药物损伤组、低浓度异丙酚组、中浓度异丙酚组、高浓度异丙酚组与正常对照组比较均显著较高（P＜0.05）。

表1 各组神经细胞存活率、LDH 漏出率、细胞凋亡率比较 （±s）

表1 各组神经细胞存活率、LDH 漏出率、细胞凋亡率比较 （±s）

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3 讨论

当组织细胞受到损伤发生缺血缺氧4 min即可造成神经元的死亡。尽管机体存在一系列的代偿调节机制，但这种调节机制有一定的限度，一旦超过限度，就可造成神经元损伤，细胞的凋亡与过氧化、自由基对细胞损伤有着直接作用。

人体内的活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）主要有超氧阴离子，羟自由基（OH-）、一氧化氮自由基（NO-）、烷自由基、烷氧基和烷过氧基、脂质过氧化物自由基等。在有氧呼吸过程中从线粒体呼吸链中可渗漏一些还原不完全的氧分子，以致产生大量的·O2-和H2O2，其产生来源有中性粒细胞、线粒体、Ca2＋超载［3］。过氧化氢（H2O2）和·O2由许多细胞氧化代谢反应产生，包括黄嘌呤氧化、NADPH 氧化、花生四烯酸经环氧化酶（COX-2）和脂氧化酶（lipoox-idase）代谢、单胺氧化酶（monoamine oxidase，MAO）和线粒体呼吸链，也能由儿茶酚胺的自氧化非酶通路形成。一氧化氮由一氧化氮合酶把精氨酸转化成瓜氨酸后形成，·O2-并非直接诱导脂质过氧化［4］，但是与NO 反应形成超氧化氮（ONOO-），后者启动脂质过氧化过程。

依达拉奉（3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮）为无色或近无色透明溶液的一种自由基清除剂，能抑制黄嘌呤氧化酶和次黄嘌呤氧化酶的活性，清除自由基，提高过氧化物歧化酶（SOD）活性，增强细胞总抗氧化能力，抑制细胞膜过氧化［5］，还能刺激前列环素的生成，减少炎症介质白三烯的生成，可以显著提高细胞稳定性，对神经细胞损伤起到保护作用，减少细胞凋亡率，增加细胞存活率。

［1］刘辉，王迪芬，付江泉，等.异丙酚和依达拉奉对脑缺血／再灌注损伤保护作用的研究比较［J］.中国危重病急救医学，2008，20（11）：691-692.

［2］朱晓蕾，吴晓新，王中原，等.依达拉奉对小鼠急性脑缺血-再灌注损伤的保护作用［J］.江苏医药，2011，37（7）：745-748.

［3］付江泉，王迪芬，刘辉，等.神经生长因子和依达拉奉对缺血／再灌注损伤脑保护作用的比较研究［J］.中国危重病急救医学，2010，22（4）：226-229.

［4］吴务权.依达拉奉对脑缺血再灌注损伤的保护作用［J］.中国医科大学学报，2005，36（6）：577.

［5］王永生.依达拉奉对脑缺血再灌注损伤保护作用机制的研究［J］.药物与临床，2011，18（24）：48.