邹 容，赵萍萍，陈 熙，屈元姣，曹轶林，刘陶文

(广西壮族自治区南溪山医院肿瘤科，广西 桂林541002)

淋巴管生成在肿瘤的淋巴转移过程中起重要作用。血管内皮生长因子A(VEGF-A)通过结合血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)促进淋巴管新生，从而使肿瘤发生淋巴转移［1-3］。目前关于VEGF-A 及VEGFR-2 在鼻咽癌中的临床意义尚未见报道。作者检测了鼻咽癌患者血清VEGF-A 及VEGFR-2 的水平，并探讨这些分子的水平与鼻咽癌临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2010年5月至2011年5月广西壮族自治区南溪山医院肿瘤科收治的68 例鼻咽癌患者，均经病理诊断为低分化鳞状细胞癌。其中男性53 例，女性15 例;年龄21 ～63 岁，中位年龄42 岁;初治者32 例(治疗前组)，按鼻咽癌2008年分期标准进行分期:I期1 例，Ⅱ期5 例，Ⅲ期18 例，Ⅳa 期8 例;复发者15 例，其中单纯原发灶和(或)颈部复发9 例，单纯远处转移6 例(以骨、肝、肺为主);完全缓解者21例。排除在观察期间存在明显感染或组织创伤患者。健康对照组20 例为同期在该院健康体检者，并排除近期组织创伤、感染以及糖尿病和妊娠期等，均无肿瘤病史，男性15 例，女性5 例;年龄23 ～59 岁，中位年龄41岁。

1.2 标本采集 清晨空腹取外周静脉血2 mL，室温自然凝固，2 000 r·min-1，10 min 分离血清，置-70 ℃冰箱保存，备测。所有标本无溶血、黄疸、脂浊。实验前30 min 取出平衡至室温。

1.3 血清VEGF-A、VEGFR-2 的测定方法 严格按照VEGF-A、VEGFR-2 ELISA 试剂盒(购自武汉华美生物工程有限公司)说明书进行操作。所有受检样本和试剂盒内的标准品同批次检测。采用ELISA 法定量检测游离状态的VEGF-A 及VEGFR-2 水平，于450 nm处测OD值。根据标准曲线计算出相应的测定值。每份标本均采用复孔检测。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0 进行统计分析。定量数据以±s表示，2 组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析、q检验，参数间的相关性分析采用Spearman相关分析。检验水准α= 0.05。

2 结果

2.1 不同患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平 初治、复发组患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平均高于健康对照组、完全缓解组(P均＜0.05);复发组患者两者水平高于初治组(P＜0.05);完全缓解组与健康对照组两者水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1 。

表1 健康对照组与鼻咽癌患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平比较

2.2 初治鼻咽癌患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平与临床病理特征的关系 初治组鼻咽癌患者T3+T4期、Ⅲ+Ⅳ期患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平明显高于T1+T2期、I+Ⅱ期患者(P均＜0.05)。见表2 。

表2 初治组鼻咽癌患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平与临床病理特征的关系

2.3 血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平与鼻咽癌淋巴转移的关系 32 例初治患者中，有淋巴转移、远处转移鼻咽癌患者血清VEGF-A 及VEGFR-2 水平明显高于无淋巴转移、无远处转移者(P均＜0.05);随着N分期增高，血清VEGF-A、VEGFR-2 水平相应上升，且不同N 分期之间两者差异均有统计学意义(P均＜0.05)。见表3。

表3 血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平与鼻咽癌淋巴转移的关系

2.4 血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平的关系 32 例初治鼻咽癌患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平呈正相关(r=0.810，P＜0.05)。

3 讨论

鼻咽癌是我国常见的恶性肿瘤之一，以早期发生颈部淋巴转移为特点，淋巴转移也是鼻咽癌治疗未控和复发的主要原因。肿瘤淋巴转移涉及淋巴管新生，而淋巴管新生的调控机制尚不清楚。目前有报道［1-3］认为VEGF-A 对肿瘤淋巴结转移有促进作用。

VEGF 家 族 包 括 VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、胎盘生长因子和VEGF-F［4］。VEGFR 包括VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3。上述VEGF与其相应受体结合后所产生的生物学效应在血管和淋巴管生成方面发挥不同作用。目前研究已证实VEGFC/D 可通过VEGFR-3 信号通路促进淋巴管新生［5］。既往认为，VEGF-A 是最主要的促血管生长因子，能促进血管内皮细胞分裂和增殖，并增强血管内皮通透性以促进肿瘤的生长和转移［6］。然而，近年来国外报道VEGF-A 能通过激活淋巴管上的VEGFR-2 促进淋巴转移。Nagy 等［1］将表达VEGF-A 的腺病毒导入小鼠，发现VEGF-A 发挥强大的促淋巴管生成作用，而且生成的淋巴管具有管壁大、无功能瓣膜、淋巴液流动缓慢及淋巴清除率低等特点，这同高表达VEGF-A 的肿瘤中淋巴管特点极其相似。此外，Hirakawa 等［2］将VEGF-A 植入转基因肿瘤老鼠皮肤中，发现VEGF-A不仅有力地推动多级皮肤癌变，同时与VEGFR-2 结合表达在发生转移的前哨淋巴结和远处淋巴结的新生淋巴管中，该研究还发现VEGF-A 不仅促进原发肿瘤中的淋巴管新生，同时促进淋巴结中的淋巴管新生。Hong 等［3］在小鼠淋巴内皮细胞中发现VEGF-A 与VEGFR-2 表达，阻断VEGF-A 与VEGFR-2 可抑制淋巴管新生。在动物皮肤黑色素瘤模型中，阻断VEGF-A与VEGFR-2 可抑制肿瘤细胞的增殖和扩散［7］。上述结果提示:VEGF-A 与VEGFR-2 能促进肿瘤细胞通过淋巴系统发生远处转移。

沙丹等［8］用免疫组化法检测了鼻咽癌组织中VEGF 与VEGFR-2 的表达，发现VEGF 和VEGFR-2 蛋白表达与原发肿瘤侵犯范围、淋巴结转移、临床分期有关，且两者表达呈正相关。本研究观察到鼻咽癌临床晚期患者血清VEGF-A、VEGFR-2 水平明显高于早、中期患者，提示两者与鼻咽癌发生、进展有密切关系。复发组两者水平明显高于初治组、健康对照组、完全缓解组，这可能是残留的肿瘤细胞进行增殖、分化，并释放大量VEGF-A 进入血循环所致。初治鼻咽癌患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 含量高于健康对照者，此与黄小红等［9］对结肠癌的研究结果相似。完全缓解组患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平显著降低，但略高于健康人，此可能与完全缓解患者仍处于癌症状态，体内仍存在微小癌灶有关。VEGF-A 除了与VEGFR-2 结合还可通过VEGFR-1 促进微血管的生成，从而促进淋巴和血行转移［10］。本研究结果表明，VEGF-A、VEGFR-2水平在T3～T4期与T1～T2期、淋巴结转移与否、远处转移与否之间差异有统计学意义，提示两者在鼻咽癌直接侵犯和淋巴转移中均发挥重要作用。

本文结果显示，有远处转移患者两分子水平高于无远处转移者，不同N 分期之间VEGF-A、VEGFR-2 分子水平比较差异均有统计学意义，且两分子之间呈正相关，推测两分子共同作用对促进淋巴转移有重要作用，其机制可能为:1)VEGF-A 与VEGFR-2 结合后导致内皮细胞增殖和新生淋巴管形成［11］，不仅诱导在肿瘤外周形成新的淋巴管，还使现存的淋巴管增生;2)肿瘤组织淋巴管增多，淋巴管占据的面积增大，使肿瘤细胞有更多机会与淋巴管接触，进而侵袭淋巴管并形成转移。在对其他肿瘤的临床研究中，VEGF-A 与VEGFR-2 表达与肿瘤临床病理特征均关系密切，如在肺癌、输卵管癌、胃癌、乳腺癌中明显增高［12-15］。

检测VEGF-A 与VEGFR-2 水平可作为判断肿瘤淋巴转移的参考指标，并对鼻咽癌患者预后的临床评估具有重要的参考价值。对于主要经淋巴道转移的肿瘤采用针对阻抑新生淋巴管治疗，可能成为继抗肿瘤新生血管治疗之后的又一肿瘤生物治疗新靶点。目前针对VEGF 信号通路的阻抑新生血管的新药显示了良好的发展前景，但易导致器官出血、伤口愈合延迟等毒副反应［16］。因此进一步深入研究VEGF-A 及其受体在鼻咽癌组织中的表达及作用机制，将有助于了解鼻咽癌发病机制及为其药物治疗提供新的理论依据。

［1］Nagy JA，Vasile E，Feng D，et al.Vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor induces lymphangiogenesis as well as angiogenesis［J］.J Exp Med，2002，196(11):1497 -1506.

［2］Hirakawa S，Kodama S，Kunstfeld R，et al.VEGF-A induces tumor and sentinel lymph node lymphangiogenesis and promotes lymphatic metastasis［J］.J Exp Med，2005，201(7):1089 -1099.

［3］Hong YK，Lange-Asschenfeldt B，Velasco P，et al. VEGF-A promotes tissue repair-associated lymphatic vessel formation via VEGFR-2 and the alpha1beta1 and alpha2beta1 integrins［J］. FASEB J，2004 ，18(10):1111 -1113.

［4］吴生华，俞继卫，姜波健.VEGF-C 及其受体与胃癌淋巴转移关系的研究进展［J］.中国普外基础与临床杂志，2010，17(8):872-875.

［5］Mandriota SJ，Jussila L，Jeltsch M，et al.Vascular endothelial growth factor-C-mediated lymphangiogenesis promotes tumour metastasis［J］.EMBO J，2001，20(4):672 -682.

［6］顾阳春，马力文. VEGF/VEGFR 与胃癌［J］. 癌症进展，2010，8(1):71 -74.

［7］Mehnert JM，McCarthy MM，Jilaveanu L，et al.Quantitative expression of VEGF，VEGF-R1，VEGF-R2，and VEGF-R3 in melanoma tissue microarrays［J］.Hum Pathol，2010，41(3):375 -384.

［8］沙丹，何友兼.VEGF 及其受体Flt-1、KDR 在鼻咽癌组织中的表达及意义［J］.癌症，2006，25(2):229 -234.

［9］黄小红，周斌，蒋志龙，等.血清VEGF-A、CEA 检测在结肠直肠癌的诊断及意义［J］. 外科理论与实践，2010，15(3):294-296.

［10］周怀君，寻庆英，夏宝妹，等.VEGF-A 及其受体VEGFR-1 与子宫内膜癌生物学行为关系的探讨［J］. 东南大学学报:医学版，2008，27(4):275 -278.

［11］Cursiefen C，Chen L，Borges LP，et al. VEGF-A stimulates lymphangiogenesis and hemangiogenesis in inflammatory neovascularization via macrophage recruitment［J］. J Clin Invest，2004，113(7):1040 -1050.

［12］陈睿，张幸平，袁光波.非小细胞肺癌VEGF-A 的表达与前哨淋巴结新生淋巴管形成及转移的关系［J］. 重庆医科大学学报，2009，34(7):830 -832.

［13］李新春，李新国. MK、VEGF-A 在原发性输卵管腺癌中的表达及其意义［J］.实用预防医学，2010，17(6):1065 -1066.

［14］樊晴伶，尹一童.血管内皮生长因子与胃癌转移及预后的研究进展［J］.中国实用医药，2009，4 (24):248 -249.

［15］Mohammed RA，Green A，El-Shikh S，et al.Prognostic significance of vascular endothelial cell growth factors-A，-C and -D in breast cancer and their relationship with angio- and lymphangiogenesis［J］.Br J Cancer，2007，96(7):1092 -1100.

［16］于顺江. 抗VEGF 肿瘤靶向治疗进展［J］. 癌症进展，2010，8(2):175 -179.