李 娟 盖 凌 魏 斌 王洪岩 王磊光 邱 毅 张 琦 于小洁

山东省计划生育科研所，山东省优生重点实验室(济南，250002)

已有的研究表明，胚胎在体外培养与体内生长其形态学和发育速度均存在差异。随着培养液的不断改进，胚胎的体外发育率得到了很大提高，但目前所用的各种培养系统还不能完全模拟体内胚胎供给环境，胚胎的发育率及质量仍存在很多问题。如何改善胚胎体外生长环境，提高胚胎质量与发育潜能，一直是研究的热点。胚胎体外培养中使用共培养由来已久，先后使用过多种辅助细胞与胚胎共培养，如人及牛输卵管上皮细胞、非洲绿猴肾细胞、颗粒细胞等。但是人们对共培养的益处尚无一致意见。本研究采用人卵丘细胞、昆明鼠卵丘细胞、昆明鼠成纤维细胞等3种共培养体系与昆明鼠早期胚胎共培养，观察胚胎发育情况，筛选适宜体外培养条件，探讨早期胚胎理想生存环境。

1 材料与方法

1．1 主要试剂与仪器

1．1．1 试剂 孕马血清(宁波第二激素厂)，人绒毛膜促性腺激素(hCG，丽珠制药厂)，胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，DMEM培养基和胰蛋白酶(Gibco公司)，丝裂霉素 －C(Sigma公司)，透明质酸酶(Sigma公司)，IVC序贯培养液(IVC－ONE液、IVC －TWO 液、IVC，美国)，Hoechst染色试剂盒(碧云天生物技术研究所)。

1．1．2 仪器 解剖显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜(Nikon)，二氧化碳培养箱(Galaxy)。

1．2 方法

1．2．1 人卵丘细胞共培养体系制备 人卵丘细胞取自因男方因素不育需做卵胞浆内单精子注射的女性患者，取卵后获得的卵冠丘复合体用80U/ml透明质酸酶分离卵子和卵丘细胞。……