段文昌，赵海泉，张 莉，赵 建

（1.安徽农业大学 生命科学学院，安徽 合肥230036；2.安徽省植物生物技术实训中心，安徽 六安237012）

盐肤木（Rhus chinensis Mill.）也称山梧桐、乌盐泡、五倍子树等，为漆树科的多年生小乔木或灌木，一般高5～10m，对环境的适应性很强，在我国境内除了新疆、青海等地外都有分布，为我国重要的经济树种之一［1］。关于盐肤木的利用在《山海经》、《博物志》等许多古今典籍中都有记载，作为药用最早见于《本草拾遗》，具有清热解毒、祛风化湿、止血化瘀、降火化痰、舒筋活络、生津润肺等功效［2-4］。但迄今为止，有关盐肤木果实多糖提取的研究却鲜有报道。

本文采用热水浸提法，结合单因子试验和L9（34）正交试验设计，筛选出盐肤木果实多糖的最佳提取工艺，为盐肤木果实多糖的开发提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料

盐肤木果实来源：2010年12月采自于霍山县大化坪。

盐肤木果实处理：将采得的果实置105℃烘箱中烘至恒重，粉碎过40目筛。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 仪器

WFX-130型原子吸收分光光度计（北京瑞利分析仪器公司），101AS-2型不锈钢数显电热鼓风干燥箱（上海浦东跃欣科学仪器厂），FA2004电子天平（上海精科天平），数显恒温水浴锅（国华电器有限公司），索氏提取器等。

1.2.2 试剂

葡萄糖、浓硫酸、氯仿、苯酚等试剂均是国产分析纯。

1.3 方法

1.3.1 单因素实验

1.3.1.1 浸提温度单因素实验

分别准确称取0.5000g盐肤木干粉于7组锥形瓶中（每组3个），设定料液比为1∶60，提取时间为2 h，设定各组提取温度分别为40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃，采用水浴加热回流提取，回流结束后过滤，收集滤液，用蒸馏水定容至一定体积。分别测定各组溶液中多糖含量。

1.3.1.2 浸提时间单因素实验

分别准确称取0.5000g盐肤木干粉于7组锥形瓶中（每组3个），设定料液比为1∶60，提取温度70℃，设定提取时间分别为1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h，回流提取，回流结束后过滤，收集滤液，用蒸馏水定容至一定体积。分别测定各组溶液中多糖含量。

1.3.1.3 料液比单因素实验

分别准确称取0.5000g盐肤木干粉于7组锥形瓶中（每组3个），设定提取温度为70℃，提取时间为2h时，设定料液比分别为1∶20、1∶40、1∶60、1∶80、1∶100、1∶120、1∶140，进行回流提取，回流结束后，过滤，收集滤液，用蒸馏水定容至一定体积。分别测定各组溶液中多糖含量。

1.3.2 正交试验因素水平［5］

在单因素试验的基础上，采用L9（34）正交试验设计，进行3因素3水平试验，研究盐肤木果实多糖提取的最佳工艺参数。设计正交因素水平如表1。

表1 正交试验因素水平表

1.3.3 盐肤木果实多糖的含量测定

采用苯酚-硫酸法［6-7］。

1.3.3.1 标准曲线的制作

取浓度为40μg／mL的标准葡萄糖溶液，分别吸取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6mL，用水补至2.0mL，摇匀后加入1.0mL的6%苯酚溶液，继续摇匀再迅速加入浓硫酸5.0mL，混匀后放置20 min，待全部冷却后，在波长490nm处测定吸光度。

回归方程：A＝0.0194C＋0.004，R2＝0.9996。

1.3.3.2 样品吸光度的测定

把过滤后的粗糖溶液定容到100mL容量瓶中，在定容后的容量瓶中分别取0.2mL于试管中，再加1.8mL的水，按标准曲线测定方法测定吸光度。

2 结果与分析

2.1 单因素实验结果

2.1.1 提取温度对多糖提取率的影响

温度对多糖提取率的影响见图1。

图1 提取温度对多糖提取率的影响

由图1可知，随提取温度的升高，多糖提取得率呈现出先增加后下降的趋势，提取温度为70℃时，盐肤木果实多糖提取率最高，因此70℃为盐肤木果实多糖提取的最佳温度。

2.1.2 提取时间对多糖提取率的影响

时间对多糖提取率的影响见图2。

图2 提取时间对多糖提取得率的影响

由图2可知，提取时间小于4h时，随提取时间的延长，提取率显著提高，4h后变化缓慢，基本稳定，继续增加提取时间对多糖提取率的提高无显著影响，因此提取时间最佳为4h。

浸提时间对多糖得率的影响较小，随着浸提时间的延长，可能是浸提时间过长，多糖在水中的溶出趋于平衡，多糖得率提高不明显［8］。

2.1.3 料液比对多糖提取率的影响

料液比对多糖提取率的影响见图3。

图3 料液比对多糖提取得率的影响

由图3可知，随料液比的加大，多糖提取得率逐渐增加，料液比在1∶60之后多糖得率增加不明显，且考虑到溶剂量的加大为后续的浓缩增加负担，因此提取料液比1∶60最合适。

2.2 正交试验结果与分析

正交试验结果见表2、3。

表2 L9（34）正交试验结果分析表

表3 L9（34）正交方差分析表

由表2和表3可知，由极差R分析表明，影响盐肤木果实多糖提取得率的主次顺序依次为C（料液比）＞A（浸提温度）＞B（浸提时间）。即浸提时间对盐肤木果实中多糖的影响最小，浸提温度次之，料液比对盐肤木果实中多糖的影响最大，即对提取效果影响显著，最佳提取条件是A2B2C3，即浸提温度为70℃，浸提时间4h，料液比1∶60。

2.3 最佳提取工艺的重复验证实验

采用正交试验优化得出的最佳提取工艺条件虽然在正交设计的9个组合之列，但是为了验证正交设计优化理论的可行性，在得出的最佳提取工艺条件下将实验重复，同时将正交设计9个组合中多糖得率最高的实验条件设置为对照（见表4）。由表4可见，正交优化的最佳工艺条件多糖的得率最高，验证了正交设计优化理论的可行性。

表4 最佳实验条件下重复实验结果

3 讨论

影响盐肤木果实多糖提取得率的主要因素有料液比、浸提温度、浸提时间等。实验结果表明，料液比对盐肤木果实多糖得率的影响最大，溶剂用量增大，有利于盐肤木果实多糖的溶出。当料液比设置为1∶60时，多糖得率较高，表明多糖溶解较为充分。如果料液比设置太小，多糖就不能完全溶解，会造成多糖提取不充分；料液比设置过大，回收、过滤、转移等工序操作较困难。

采用正交试验法优化盐肤木果实多糖提取工艺，盐肤木果实多糖得率影响因素的优先次序分别为：C（料液比）＞A（浸提温度）＞B（浸提时间）。最佳提取工艺组合为：A2B2C3，即料液比1∶60、浸提温度70℃、浸提时间4h，盐肤木果实多糖得率为4.09%。

本实验采用传统的热水浸提法，这种提取方法条件简单，成本较低，易于操作，提取条件好控制。可以保证多糖结构的稳定性，有利于进一步对多糖进行分离纯化及其生物活性的评价。

［1］中国科学院《中国植物志》编辑委员会.中国植物志［M］.北京：科学出版社，1999.

［2］赵军，崔承彬，蔡兵，等.国产盐肤木属植物的研究进展［J］.解放军药学学报，2006，22（1）：48-51.

［3］孙美荣，张照.盐肤木开发利用研究［J］.昌维师专学报（自然科学版），1997，16（5）：31-32.

［4］江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海人民出版社，1997.

［5］吕炜锋，王兆富，陈捷，等.南瓜多糖的提取纯化及其复方口服液的降血糖作用研究［J］.药学进展，2004，28（1）：515-518.

［6］张拥军，许晓晖，李昌敏，等.活性南瓜多糖的提取与分析［J］.食品工业科技，2002，23（11）：19-21.

［7］邬卫东，张晓文.硫酸-苯酚法测定枸杞多糖含量［J］.中草药，2003，（3）：38-39.

［8］刘国聪，曾楚杰，刘力恒，等.沙田柚皮水溶性多糖的提取和测定［J］.食品科学，2007，28（11）：223-226.