龚其海，赵 万，余 兰，王 毅，刘 波，石京山

(遵义医学院1．药理学教研室暨贵州省基础药理重点实验室;2．药学院实习生;3．药学院分析化学教研室，贵州遵义 563099)

党参出典于《本草从新》［1］，为桔梗科植物党参(Codonopsis pilosula(Franch)Nannf)及其同属多种植物的干燥根，是我国传统的补益药。产地众多，种类各异，主产于贵州、山西、四川等省。党参化学成分复杂。几十年来，从党参中分离鉴定了10种甾醇类，21种糖苷类，5种生物碱类及含氮成分，34种挥发油成分，13种三萜类及其他类成分［2］。党参的药理作用较为复杂，主要包括补血作用、增强机体的免疫功能等作用［3］，并以其相关活性部位或复方广泛用于临床。

贵州道真县阳溪镇、洛龙镇等地盛产“洛龙党参”，是贵州著名的药食两用特有药材，质量优良，但产量有限，严重限制了其后续开发。为扩大“洛龙党参”的种植规模，余庆县关兴镇地理环境与道真县洛龙镇较为相似，因此考虑对其异地移栽。然而，移栽后是否改变其主要成分的主要药理学效应尚不清楚。因此，本研究观察并比较道真洛龙党参及其移栽余庆关兴后其主要成分党参多糖对环磷酰胺(cyclophosphamide，CTX)所致小鼠免疫功能抑制的影响，旨在阐明道真洛龙党参移栽后其主要成分的主要药理学效应是否发生改变提供实验依据。

1 材料与方法

1．1 实验动物 昆明种小鼠72只，体重(18～22)g，雌雄各半，由中国人民解放军第三军医大学实验动物中心提供，许可证号:SCXK(渝)2007－0003。

1．2 主要药品及试剂 印度墨汁(南京都莱生物技术有限公司)，注射用CTX(江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字:H320208570)，黄芪颗粒(贵州汉方制药有限公司，国药准字:Z19993254)，洛龙党参(采自贵州省道真仡佬族苗族自治县洛龙镇)，移栽后党参(采自贵州省余庆县关兴镇)。

1．3 主要仪器 电子天平(北京赛多利斯电子天平有限公司)，电热鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)，HITACHI U3010紫外分光光度计(HITACHI公司)，FZ植物粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)。

1．4 党参多糖的提取及精制 选择根条肥壮，无虫蛀霉变、无破损的洛龙党参及移栽后党参，洗净，阴干，FZ植物粉碎机粉碎，过60目筛，80℃干燥5h备用。后续提取及精制按照本课题组既往方法进行［4］。实验中两种多糖的提取及精制过程一致。

1．5 实验动物的分组及处理 昆明种小鼠72只，雌雄各半，体重20±2g，按照预实验研究结果随机分为空白组，模型组，阳性组，道真洛龙党参低、高剂量组及移栽组共6组，每组12只。除空白组外，其余各组均腹腔注射 CTX 100 mg/kg，连续3 d。造模当日起，连续灌胃给药7 d(0．02 mL/g)，阳性组灌胃黄芪颗粒0．2 g/kg，道真洛龙党参低、高剂量组分别灌胃道真洛龙党参多糖400 mg/kg和800 mg/kg，移栽灌胃移栽后的党参多糖800 mg/kg，空白组及模型组灌胃等体积的生理盐水，每天1次。

1．6 小鼠静注碳粒廓清速率的测定 末次给药24 h后称重，经小鼠尾静脉注射用1%明胶稀释5倍的印度墨汁各0．1 mL/10 g，即刻计时，分别于5，10 min(记录为 t1、t2)时眼眶静脉取血 80 μl，各加入0．1%碳酸钠溶液8 m摇匀，分光光度计在波长680 nm处测吸光度值，分别记录为A1、A2，计算廓清速率K。第2次取血后将小鼠脱颈椎处死，分别取肝(剔除胆囊)、脾、胸腺，剔除杂质后用生理盐水洗去血液，再用滤纸吸干血迹称重，计算吞噬指数α。其中，廓清速率(K)=(logA1－logA2)/(t2－t1)，吞噬指数α=K1/3×体重/(肝重+脾重)。1．7 小鼠胸腺指数、脾脏指数的计算 按照1．6中小鼠体重(g)，脾、胸腺(mg)，计算小鼠胸腺指数、脾脏指数。公式:胸腺指数=(胸腺重量/小鼠体重)×10，脾脏指数 =(脾脏重量/小鼠体重)×10。

1．8 统计学处理 所有数据用SPSS 12．0统计软件处理，各项指标采用均数±标准差(x±s)表示，多组间比较使用one－way ANOVA检验(方差齐使用LSD法，方差不齐使用Dunnett＇T3法)。P＜0.05认为有统计学意义。

2 结果

2．1 党参多糖对小鼠静注碳粒廓清速率的影响小鼠处死后，计算其廓清速率K和吞噬指数α。结果发现，模型组K和α均低于空白组。然而，阳性药组、道真洛龙党参高剂量组及移栽组K和α均高于模型组。值得注意的是，道真洛龙党参高剂量组及移栽组的K和α均未见差异(见表1)。

表1 党参多糖对小鼠静注碳粒廓清速率及吞噬指数的影响(n=12，x±s)

2．2 党参多糖成分对小鼠胸腺、脾脏指数的影响按照公式计算了小鼠的胸腺指数和脾脏指数。结果发现，模型组小鼠胸腺指数和脾脏指数较空白组明显降低。然而，阳性药组、道真洛龙党参高剂量组及移栽组小鼠的胸腺指数和脾脏指数均明显高于模型组。值得注意的是，道真洛龙党参高剂量组及移栽组的胸腺指数和脾脏指数均未见差异(见表2)。

表2 党参多糖对小鼠胸腺、脾脏指数的影响(n=12，x±s)

3 讨论

CTX是临床治疗恶性肿瘤最常用的烷化剂代表药物之一，也是一种很强免疫抑制剂［5］。其抑制免疫的主要机制包括杀伤淋巴细胞(尤其是早期对B细胞)、NK细胞，抑制T淋巴细胞对抗原刺激后的淋巴母细胞转化及抑制B细胞的特异性抗体反应等［6］。在实验室研究过程中，通常将CTX用作工具药建立免疫功能抑制模型［7］。本研究发现，小鼠腹腔注射CTX后，其碳粒廓清速率、胸腺及脾脏指数均较空白组明显降低。碳粒廓清试验是根据血流中碳粒被廓清的速度，判断单核－巨噬细胞的功能。当颗粒状异物静脉注入小鼠血循环后，可迅速被单核细胞清除，主要被定居在肝脏和脾脏的巨噬细胞吞噬。当异物量恒定时，其血流中颗粒清除率可反映单核－巨噬细胞吞噬功能。碳粒廓清速率下降，反映单核－巨噬细胞的功能降低。本研究结果与文献报道一致［7］。胸腺和脾脏是机体主要的免疫器官，其相对重量的变化在免疫评价中占有重要地位，脾脏和胸腺指数显著降低，反映出免疫功能受损［8］。

本研究通过CTX所致小鼠免疫功能抑制模型，选用黄芪颗粒作为阳性对照［9］，观察并比较遵义道真洛龙党参及其移栽余庆关兴后所含多糖的免疫功能增强作用。结果发现，道真洛龙党参多糖高剂量组及移栽后的党参多糖在等剂量下均产生了与黄芪颗粒相似的效应，碳粒廓清速率及胸腺指数和脾脏指数均明显高于模型组，这表明两种多糖均具有减轻CTX对小鼠免疫功能的抑制作用，与文献报道一致［10］。值得注意的是，遵义道真洛龙党参及其移栽余庆关兴后所含多糖在等剂量下对小鼠免疫功能的影响未见显著差异。本研究在对两种多糖的提取及精制时采用相同条件，且提取工艺也完全相同，故可以认为在本研究条件下，道真洛龙党参经移栽后其主要成分之一党参多糖对小鼠免疫功能的影响未发生改变。从该角度讲，其移栽后的主要活性成分的主要药理作用并未受到影响。

总之，本研究表明，遵义道真洛龙党参及其移栽余庆关兴后所含多糖均可减轻CTX所致小鼠免疫功能抑制，且移栽后所含多糖的免疫功能增强作用未受影响。

［1］王世民．党参出典小考［J］．山西中医，2005，21(6):42－43．

［2］朱恩圆，贺庆，王峥涛，党参化学成分研究［J］．中国药科大学学报，2001，32(2):94 －95．

［3］焦红军．党参的药理作用及其临床应用［J］．临床医学，2005，25(4):89，92．

［4］余兰，陈华，娄方明．洛龙党参的多糖含量测定［J］．贵州农业科学，2010，38(7):190－191．

［5］Motoyoshi Y，Kaminoda K，Saitoh O，et al．．Different mechanisms for anti－tumor effects of low－ and highdose cyclophosphamide［J］．Oncol Rep，2006，16(1):141－146．

［6］Krüger K，Mooren F C．T cell homing and exercise［J］．Exerc Immunol Rev，2007，13:37 －54．

［7］杨颖，蔡玟，黄志彪，等．环磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型建立与评价［J］．中国公共卫生，2008，28(5):581－583．

［8］张汝学，贾正平，李茂星，等．锁阳Part III对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影响［J］．中药材，2011，31(3):407－409．

［9］许鹏飞，孙京惠，高福云，等．黄芪颗粒对小鼠免疫调节功能的影响［J］．中国中医药信息杂志，2007，14(4):27－28．

［10］张晓君，祝晨蔯，胡黎，等．党参多糖对小鼠免疫和造血功能的影响［J］．中药新药与临床药理，2003，14(3):174－176．