吴金斌，漆正宇，晏耀明，翟庆娜，余振东

（1.北京大学深圳医院 检验科，2.北京大学深圳医院 男性生殖与遗传重点实验室，广东 深圳518036）

膀胱癌是一类常见的泌尿系统恶性肿瘤，其中移行细胞癌占膀胱癌发病率的90%以上［1］。染色质重建复合物SWI／SNF亚基AT丰富结合域1A基因（AT rich interactive domain 1A，ARID1A）是近两年来肿瘤研究关注的一个重要基因，膀胱移行细胞癌中ARID1A高比率突变［2］，但我们前期测序发现在膀胱癌细胞系T24中ARID1A可以正常表达。ARID1A作为一个染色质重建复合物亚基基因，跟细胞增殖密切相关［3］。本研究通过有限稀释方法分离出膀胱移行细胞癌细胞系T24的高增殖活力亚克隆细胞株，体外评价ARID1A表达与细胞增殖转移潜能关系，并为进一步研究ARID1A基因功能提供目的细胞。

1 材料和方法

1.1 材料

基础培养基 H－DMEM（Gibco USA），10%胎牛血清（fetal bovine serum，FBS，Gibco USA），左旋谷氨酰胺（Gibco USA），青霉素和链霉素合剂（Invitrogen USA），胰 酶 （Gibco，USA），Trizol（Invitrogen，USA），CellTiter 96○RAQueous One Solution Cell Proliferation Assay（a）（Promega，USA），Platinum○RSYBR○RGreen qPCR SuperMix UDG kit（Invitrogen，USA）。

1.2 方法

1.2.1 T24细胞培养 T24细胞系为本实验室保存，传代培养。培养基包括90% 基础培养基HDMEM，和10%胎牛血清（fetal bovine serum，FBS），同时添加1mmol／L左旋谷氨酰胺、100U／ml青霉素和100μg／ml链霉素合剂。细胞消化采用0.25%胰酶。在培养基中添加10%体积FBS和8%DMSO配成冻存液，按常规流程液氮冻存细胞。

1.2.2 高增殖亚克隆细胞株形成 将生长旺盛的T24细胞从培养皿消化后，稀释到1×102个／ml，以1／2浓度梯度稀释接种到96孔板中，5h内在倒置显微镜下观察，标记单细胞孔，第10天将从单细胞扩增形成的细胞亚克隆传至24孔板，得到亚克隆细胞株。亚克隆细胞株传代培养至第3代，均一化接种培养并每天计数显微镜视野细胞数，估测筛选高增殖细胞株。……