司徒博，曹楠楠，刘丽琴，李 博，刘芹兰，林 丽，王 前，郑 磊＊

（1.南方医科大学南方医院 检验医学科，广东 广州510515；2.广州军区广州总医院 医学实验科，广东 广州510010）

RAS／RAF／MEK／ERK／MAPK信号转导通路参与细胞生长、分化、凋亡等多种生物学事件。BRAF基因的编码产物的是参与该通路信号转导的一种重要丝氨酸／苏氨酸激酶，该基因的15外显子1799位核苷酸的T→A突变是BRAF基因的热点突变（约占80%－90%）［1］，此突变使其编码的氨基酸由缬氨酸变为谷氨酸（V600E），导致该激酶活性大大增强，能持续激活MAPK信号通路，致使细胞异常增殖及分化，被认为是细胞癌变的关键因素［2，3］。在结直肠肿瘤治疗中，BRAF V600E突变情况被认为是除KRAS突变外对分子靶向药物西妥昔单抗与帕尼单抗的疗效预测的另外一个重要指标［4，5］。此外，突变的BRAF基因也是结直肠肿瘤预后较差的一个生物标志物［6］，以及区分散发性结直肠癌与Lynch综合征的分子指标［7］。因而，准确检测肿瘤组织中BRAF基因的突变情况具有重要的诊疗意义。本研究以人BRAF基因V600E突变位点设计等位基因特异性扩增引物，通过选择性扩增实现检测BRAF基因热点突变的目的，通过与金标准Sanger测序法比较，探讨该方法的可行性。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株 人大肠癌SW480及HT29细胞分别由南方医院消化科及广州军区总医院医学实验科惠赠。两株细胞均经过测序证实分别为BRAF野生型及携带BRAF V600E杂合突变。

1.1.2 结直肠癌标本 40例结直肠癌石蜡标本来源于广州军区广州总医院病理科。所有提取DNA肿瘤组织切片均经镜检证实肿瘤细胞含量大于90%。……