王维刚，王志刚，李大鹏

（吉林医药学院 附属465医院，吉林 吉林132013）

骨肽具有调节骨代谢、刺激成骨细胞增殖、促进新骨形成等药理作用，多用于骨折和骨折手术愈合及风湿、类风湿关节炎的治疗［1］。碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（OC）是成骨细胞分泌的两种非胶原成分。活性成骨细胞在早期发育阶段细胞内就富含ALP，后期成熟阶段成骨细胞可产生和分泌骨钙素［2］，因此ALP和OC不仅是成骨细胞生长和发育早期和晚期的表型标志，同时是成骨细胞的功能状态的体现，是骨形成指标。

本实验研究骨肽对体外培养成骨细胞中ALP和OC表达的影响，探讨骨肽在成骨细胞成骨功能中的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD乳鼠购自吉林大学动物实验中心。

1.2 主要试剂 DMEM－H培养基、胎牛血清（美国Gibco公司）；骨肽（黑龙江江世药业有限公司）OC放射免疫试剂盒（北京中山生物技术有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 颅盖骨分离成骨细胞 取1－3d龄小鼠乳鼠20只，无菌条件下取出颅盖骨，PBS液清洗，置入含有DMEM培养基的培养皿中，剪成碎块，0.25%胰蛋白酶中消化30min，37℃；血清终止消化，1.0g／LⅠ型胶原酶消化1h，37℃，2次，冷PBS终止消化，吸取上清液，1 000r／min离心8min，培养液冲洗细胞，以1×106密度将细胞悬液种植于10%小牛血清的DMEM培养基中，37℃、5%CO2及饱和湿度条件下培养。

1.3.2 骨肽对成骨细胞作用 骨肽按照浓度分为0.002mg／ml、0.008mg／ml、0.032mg／ml分为三个剂量，对照组加入基础培养基。分别在1d、3d、5 d利用生化法检测细胞培养液中ALP的含量。骨肽不同剂量继续作用后10d和15d，利用ELISA试剂盒检测OC含量。

2 结果

与对照组相比（见表1），骨肽浓度为0.002mg／ml时，细胞上清中ALP含量无明显改变。……