单士刚,包永芬

(湖北科技学院基础医学院,湖北 咸宁 437100)

有害性多环芳烃化合物,如苯并(a)芘[benzo(a)pyrene,B(a)P]是普遍存在的环境污染物,主要来源于香烟和含碳有机物的不完全燃烧.B(a)P不仅对机体呼吸系统有影响,而且还可以损伤免疫系统,对人类健康的影响主要表现在遗传损伤、致癌和免疫毒性等[1].目前认为B(a)P对机体的损伤可能与代谢和细胞毒性之间有一定的关系.其中重要的途径可能是代谢活化、引发自由基和氧化应激以及干扰细胞第二信号传导网络的正常运行等,从而影响细胞的活性,最终导致机体的损伤[2-4].本实验以体外培养的淋巴细胞株为研究对象,不同浓度B(a)P(0.125、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000、8.000、16.000 μmol/L)染毒16 h,分别用MTT(四甲基氮唑蓝,methylthiazolyltetrazolium)法、Elisa和Western blot法检测淋巴细胞细胞活力、细胞因子分泌以及热休克蛋白70(heat shock proteins70, HSP70)表达情况,为今后评估人群接触B(a)P对免疫系统的毒性和应激作用提供实验依据.

1 材料与方法

1.1细胞株和试剂人B细胞转化淋巴母细胞系721.221购自武汉大学中国典型培养物保藏中心.胎牛血清、RPMI-1640培养基均为美国Gibco公司产品；MTT和B(a)P购自美国Sigma公司；IFN-α、interleukin-1α和interleukin-6 ELISA试剂盒(Pierce,美国),鼠抗人单克隆HSP70,鼠抗人β-actin单克隆,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG (武汉博士德公司),其他试剂为国产分析纯.

1.2细胞培养与染毒721.221细胞培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基,置含5%CO2的37 ℃培养箱内培养.取对数生长期721.221细胞,设不同浓度的B(a)P染毒组(0.125、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000、8.000、16.000 μmol/L)、溶剂对照组(1‰DMSO, 3‰S9)和空白对照组(含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基).

1.3MTT试验取对数生长期721.221细胞,以每孔5.5×103个细胞接种于96孔培养板.设不同浓度的B(a)P 染……