翟晓红,陈振明

(杭州师范大学生物催化研究室，浙江 杭州 311121)

环己酮单加氧酶的克隆表达及酶学性质分析

翟晓红,陈振明

(杭州师范大学生物催化研究室，浙江 杭州 311121)

为研究鞘氨醇杆菌中环己酮单加氧酶的催化特性，从N.aromaticivoransDSM 12444基因组DNA克隆表达了一个编码环己酮单加氧酶的基因chmo，并分析了该基因产物的酶学性质.该基因全长1650bp，编码550个氨基酸，理论分子量为61.6 kDa.将携带此基因的重组质粒 pET28a-chmo转入E.coliBL21(DE3)后，获得了62 kDa 左右的表达产物.重组环己酮单加氧酶(CHMO)能氧化芳香族硫醚及其衍生物、链式硫醚、其他硫醚和酮类等底物，以2-氯乙基苯基硫醚为底物时活力最高(25.65 U/mg).CHMO最适反应温度和 pH分别为55 ℃和 8.87，倾向于利用 NADPH作辅酶.上述结果表明，重组CHMO是一个新型的环己酮单加氧酶，推测其与硫醚及酮类物质的氧化降解有关.

环己酮单加氧酶；鞘氨醇杆菌；优化表达；酶学性质

Baeyer-Villiger单加氧酶(BVMOs)家族属于黄素类单加氧酶，通常用来立体选择性氧化链状和环状的酮，生成相应的酯或内酯，也能催化硫、氮和磷的亲电氧化反应, 同时BVMOs还能催化酮和硼的亲核氧化反应[1].环己酮单加氧酶不仅可以提供极有价值的手性砌块，而且在手性药物的合成方面也具有很大的应用潜力.如它可以将极为廉价的非手性药物中间体双环[3,2,0]-2-双键-6-酮，加氧转化为极为昂贵的手性酯，生成物与反应物的市场价格相差近1000倍[2].它还可以催化含硫原子的手性前体生成光学活性的手性药物如莫达非尼和质子泵抑制……