赵志弘 石翠英 乔芳 王振雷 田亚娟 张虹 刘敬闪

近些年来，随着城市人口的激增，血站不仅在采供血量上增长很快，而且在实际工作当中出现了更多的正反定型不符标本，这些标本有来自血站内部检验科的，也有来自医院临床的。传统的血清学检测方法由于其自身局限性［1］，因此面临很大的挑战。笔者在实际工作中运用ABO基因定型方法解决了一些疑难血型定型的常见问题，本文以1例正反定型不符标本的鉴定为例报告如下。

1 资料与方法

1．1 一般资料 患者，女，汉族，87岁，2011年1月因褥疮入住市第一医院治疗，曾有输血史。因ABO血型正反定型不符送我血液中心配型科鉴定。

1．2 血型血清学试验 按照文献［2］操作。抗-A、抗-A1、抗-B、抗-AB、抗-H、抗-M、抗-N、抗球蛋白试剂、标准试剂ABO红细胞、谱细胞均由上海血液生物医药有限责任公司制备。

1．3 血型基因定型 采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术。DNA提取严格按照TIANGEN血液基因组DNA提取试剂盒说明书进行。引物为采用瑞典隆德Olsson等［3］研究小组与笔者自行设计，内对照为扩增人类生长激素基因(HGH)，均由上海生工合成。PCR扩增仪为美国ABI公司9700。引物混合物检测的基因特异性、突变位点和PCR产物片段大小见表1。引物序列见表2。

表1 基因分型引物检测的基因特异性、突变位点和PCR产物片段大小

表2 引物序列

1．4 PCR反应体系 总反应体系10 μl，引物浓度10 pmol/μl，dNTPs浓度 10 pmol/μl，基因组 DNA 浓度 50 ng/μl，15 mmol/L MgCL2(SIGMA 公司)，内对照引物浓度 5 pmol/μl，5 U/μl Taq DNA聚合酶(Promega)，甘油和甲酚红终浓度分别为5%和0．01%(SIGMA 公司)。

1．5 PCR循环参数 采用热启动DNA变性技术96℃预置7 min，然后按 94℃ 30 s，66℃ 30 s，72℃ 1 min 进行 32 个循环，再72℃延伸2 min。……