单晓枫，吴同垒，孟庆峰，王伟利，钱爱东

(1 吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春 130118;2 吉林出入境检验检疫局，吉林长春 130062）

维氏气单胞菌(Aeromonas veronii，AV)隶属于弧菌科气单胞菌属，是一种人－兽－鱼共患病原菌.其不仅在人抵抗力下降时，感染机体引发人的坏死性脑炎、败血症、腹泻等疾病［1－3］;而且也可引发水生动物的疾病，给水产养殖业造成巨大损失［4－6］.AV 有多种毒力因子，主要包括外毒素、蛋白酶、鞭毛、外膜蛋白等，其中，鞭毛作为大多数细菌的主要运动器官，在细菌致病性方面，起着举足轻重的作用.目前，国内AV的研究正处于起步阶段，本研究以框镜鲤Cyprinus carpio AV CY0806为研究对象，克隆其鞭毛flaA基因，并对其编码蛋白质进行了生物信息学分析，以期为框镜鲤AV的发病机理、基因工程疫苗等研究奠定基础.

1 材料与方法

1.1 菌株和载体

框镜鲤AV CY0806株分离自患病框镜鲤，为吉林农业大学预防兽医学研究室保存;大肠埃希菌Escherichia coli DH5α为吉林农业大学动物科学技术学院生物技术研究室保存;pMD18－T vector为宝生物工程(大连)有限公司产品.

1.2 主要试剂

Taq DNA聚合酶、dNTP均为宝生物工程(大连)有限公司产品;DNA凝胶回收试剂盒为爱思进生物技术有限公司产品;质粒小量抽提试剂盒为北京索莱宝科技有限公司产品;气单胞菌培养基RS为北京陆桥技术有限责任公司产品;其他试剂均为进口或国产分析纯.

1.3 引物设计与合成

根据GenBank上发表的AV鞭毛flaA基因序列，应用Primer Premer 5.0和Oligo 6.0软件设计1对引物:上游引物 P1:5'－GCGGAATTCATGGGCCTTTATATCA－3'，下游引物 P2:5'－ACGAAGCTTTTAGCCTTGCCAACAGA－3'，预计扩增片段长 915 bp，该引物由宝生……