朱俊峰, 黄小荣, 冯宇鹏, 周俊宜△

(中山大学中山医学院 1生物化学与分子生物学教研室，2实验教学中心，广东 广州 510080；3广东医学院附属西乡人民医院泌尿外科，广东 深圳 518102)

1000-4718(2012)07-1326-05

2011-12-30

2012-04-13

广东省科技计划项目(No. 2006B35502007；No.2010B031200013)；广东省自然科学基金重点项目(No.04105351)

△通讯作者 Tel: 020-87330770； E-mail: zhoujy@mail.sysu.edu.cn

MNNG诱导TERC基因沉默的16HBE细胞恶性转化模型的建立*

朱俊峰1, 黄小荣2, 冯宇鹏3, 周俊宜1△

(中山大学中山医学院1生物化学与分子生物学教研室，2实验教学中心，广东 广州 510080；3广东医学院附属西乡人民医院泌尿外科，广东 深圳 518102)

目的建立N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine, MNNG)诱导的人端粒酶RNA组分(telomerase RNA component,TERC)缺陷的人支气管上皮细胞株(16HBE)恶性转化细胞模型。方法将靶向TERC基因的shRNA干扰质粒载体转染16HBE细胞，G418抗性克隆筛选得到稳定转染的16HBE-1细胞，RT-PCR检测16HBE-1细胞TERC mRNA的干扰效率；用1 mg/L MNNG对16HBE-1细胞进行隔代染毒，每次染毒1 h；直到染毒27次转化灶的出现。分离扩增转化灶细胞并命名为16HBE-T，用软琼脂克隆形成实验和裸鼠成瘤实验鉴定细胞的转化程度。结果从转化灶分离培养的细胞能在软琼脂中生长,且转化细胞能在裸鼠体内成瘤，HE染色后光镜下显示为鳞癌。结论成功建立MNNG诱导的TERC基因缺陷的16HBE细胞恶性转化模型。

端粒酶RNA；人支气管上皮细胞；RNA干扰；N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍

端粒酶是一个核蛋白酶复合体，可以在染色体末端增加端粒的重复序列。人端粒酶由人端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase，TERT)和人端粒酶RNA组分(telomerase RNA component, TERC)组成。在大多数肿瘤细胞中，端粒酶的表达水平显著增高，如肺癌[1]、乳腺癌[2]、宫颈癌[3]等。早期资料表明，TERC的表达与端粒酶活性的调节是分离的[4]。……