樊 昕，任晓萍，李海涛，杨蓉娅

（北京军区总医院 全军皮肤病诊治中心，北京100125）

壳聚糖（Chitosan）是由葡糖胺和N－乙酰基葡糖胺构成的生物共聚物，经天然生物大分子甲壳素脱乙酰基转化而来，其结构类似糖胺聚糖（glyeosaminoglycans，GAGs），具有良好的生物相容性、生物可降解性以及抗菌消炎、止血促愈等生理功能，是优异的医用敷料及组织工程材料［1］。但是壳聚糖是否会影响真菌生物被膜（fungus biofilm）的形成尚未见相关报道。本实验应用不同浓度壳聚糖观察其对阿萨希毛孢子菌生物被膜（T.asahii BF）形成的影响，为临床研究调控真菌生物被膜提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

菌株：阿萨希毛孢子菌株1株，来源于本院皮肤科临床分离株（BZP07002），并经API20AUX生化鉴定及 DNA 序列分析验证（AS2.2174）［2］

主要试剂及材料：RPMI 1640培养基和壳聚糖购自美国Sigma公司，XTT试剂购自美国Appli－Chem公司，PMS购自Sigma公司，倒置显微镜购自日本Olympus公司，全自动酶联免疫测定仪购自美国Bio－rad公司。

1.2 方法

1.2.1 生物被膜体外构建 将－80℃保存的阿萨希毛孢子菌菌种复苏，在沙氏培养基中转种培养2次，转入酵母蛋白胨葡萄糖肉汤（YPD）中过夜振荡培养，离心、收集后，重悬于RPMI－1640中，稀释成106CFU∕ml菌悬液。在培养板中预先放入无菌的聚苯乙烯（长宽各为1.0 cm）。将2 ml该菌悬液加入到24孔培养板中，选择30℃培养48－72 h。2 h时PBS缓冲液冲洗2次，重新加入2.0 ml RPMI－1640培养液。之后每隔24 h更换一次培养液。设不加有阿萨希毛孢子菌的空白对照组。

1.2.2 生物被膜形成的定量分析 通过XTT还原比色测定法进行定量分析。测定依据通过代谢活性细胞使黄色的四唑盐XTT分裂成橘黄色的甲臜染料。……