陈国花 （山东省诸城市畜牧兽医管理局 266600）



H3N2亚型猪流感病毒多克隆抗体的制备及间接ELISA方法的建立

陈国花 （山东省诸城市畜牧兽医管理局 266600）

本试验将初步纯化的H3N2猪流感病毒注入到新西兰大白兔体内，获得了抗猪流感病毒多克隆抗体，以纯化后的猪流感病毒为抗原，初步建立了间接ELISA检测方法，确定了抗原最佳包被浓度为41.25µg/ml，血清的最佳稀释度为1:400，酶标抗体的最佳稀释度为1:1000，一抗的最佳作用时间为30min。

H3N2 猪流感病毒 多克隆抗体 间接ELISA

猪流感(Swine Influenza , SI)是全世界养猪国家常遇到的一种呼吸道疾病[1]。SIV属正粘病毒科A型流感病毒[2]，对呼吸道上皮细胞具有高度亲嗜性，故SIV感染的主要部位是支气管和细支气管上皮；呼吸道末梢部分的黏膜感染是诱发猪肺炎的重要原因。猪具有AIV和人流感病毒的受体，成为毒株间基因重配的活载体[3]，因此猪在流感病毒的禽-猪-人的种间传播过程中，扮演着流感病毒中间宿主和多重宿主的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要仪器 高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)、紫外分光光度计UV2550(日本岛津公司)、5ml注射器、漩涡震荡器MM-1(恒丰仪器厂)。

1.1.2 主要试剂 H3N2亚型的SIV、新鲜鸡红细胞、甲醛、生理盐水、弗氏不完全佐剂(FIA)弗氏完全佐剂(FCA)(Sigma公司)、HRP标记的羊抗兔IgG(北京中杉金桥公司)。试剂由诸城市畜牧局检测中心实险室保存。

1.1.3 试验动物 鸡1只、新西兰大白兔2只。

1.2 方法

1.2.1 SIV的纯化 甲醛处理的红细胞吸附释放法。（1）取1ml 50%新鲜鸡红细胞加入1ml36%甲醛，充分混匀。（2）置4℃48h，每隔3h混匀1次。（3）2000rpm离心10min后弃去上清，剩余沉淀物中加入10ml生理盐水混匀。……