彭艳辉, 骆 剑, 尹绍武, 朱晓平, 胡 静, 刘志亮, 祝 斐,齐兴柱, 胡亚丽

(1. 海南大学 海洋学院, 海南大学热带生物资源教育部重点实验室, 海南 海口 570228; 2. 南京师范大学生命科学学院, 江苏 南京 210046)

波纹唇鱼微卫星分子标记的筛选及适用性分析

彭艳辉1, 骆 剑1, 尹绍武2, 朱晓平1, 胡 静1, 刘志亮1, 祝 斐1,齐兴柱1, 胡亚丽2

(1. 海南大学 海洋学院, 海南大学热带生物资源教育部重点实验室, 海南 海口 570228; 2. 南京师范大学生命科学学院, 江苏 南京 210046)

采用磁珠富集法及利用生物素标记的(CA)15寡核苷酸探针从波纹唇鱼(Cheilinus undulatus)基因组 DNA Bsp143Ⅰ酶切位点的 400～1000 bp片段中筛选 CA/GT微卫星位点。洗脱的杂交片段克隆到PMD18-T载体上构建富集微卫星基因组文库后, 通过PCR筛选出阳性克隆进行测序。在120条序列中有88条序列包含有重复次数不少于5次的微卫星位点, 阳性序列比例达到73.33%。其中完美型(perfect)类型微卫星最多的重复次数为26次。在88条非冗长序列中, 共有28条(31.82%)微卫星重复序列两端有侧翼序列能够进行引物设计。用波纹唇鱼3个个体的混合基因进行引物筛选, 其中的24对具有清晰的扩增条带。将筛选的24对引物对波纹唇鱼1个群体的39个个体进行遗传多样性分析, 其中4对引物扩增产物为单态, 20对扩增产物呈多态性; 20对扩增多态的引物在39个个体中扩增出等位基因数为2～12, 平均有效等位基因数为3.5。该波纹唇鱼群体的PIC、Ho、He的平均值分别为0.0782、0.8513、0.5667。这20个微卫星位点适于波纹唇鱼群体遗传结构的研究分析。

波纹唇鱼(Cheilinus undulatus); 微卫星分子标记; 筛选; 磁珠富集法……