王俊伟，张丽梅，杨 慧，苑记清，任晓军，冯 凭

（1.天津医科大学总医院代谢病科，天津300052；2.天津医科大学解剖学教研室，天津 300070）

近年研究表明炎症因子在糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）的进展中起到至关重要的作用，其中结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）是促进肾脏纤维化的重要炎症因子，另有最新研究发现[1]基因敲除中期因子（midkine,MK）的小鼠能显著改善DN的进展。MK是一种肝素结合细胞因子，具有趋化炎症细胞，抗损伤和抗细胞凋亡等功能。既往对MK的研究仅局限于肿瘤、神经系统及炎症性疾病，但在DN中的作用少有报道，MK与CTGF是否存在联系尚不明确。本研究通过反义寡聚脱氧核苷酸（antisense oligodeoxynucleortides,AS-ODNs）技术抑制MK的合成，观察MK对早期DN大鼠肾脏CTGF表达水平的影响，探讨MK ASODNs在早期DN中的治疗前景。

1 材料与方法

1.1 实验动物 采用8周龄、雄性清洁级SD大鼠，体重（197±18）g，购自中国医学科学院放射医学研究所，饲养于天津医科大学动物实验中心。

1.2 实验材料 链脲佐菌素（STZ）购自美国Sigma公司；全程硫代磷酸化修饰的MKAS-ODNs购自上海生工生物公司，序列如下5′-AGGGCGAGAAGGAAGAAG-3′[2]；RNA离心柱型试剂盒购自北京百泰克公司；逆转录试剂盒购自北京全式金公司；RealtimePCRMasterMix（SYBRGreen）购自大连宝生物公司；实时荧光定量PCR引物购自北京奥科鼎盛公司。

1.3 方法 雄性清洁级SD大鼠适应性饲养1周后完全随机法分为正常组、DN组和MKAS-ODNs组各20只。DN组和MKAS-ODNs组均行单侧肾脏切除术，高糖高脂饲料饲养4周，随后尾静脉注射STZ 30mg/kg；正常组行切皮假手术，普通饲料饲养4周，尾静脉注射柠檬酸缓冲液30mg/kg。注射STZ1周采用葡萄糖氧化酶法连续监测3d随机血糖均≥16.7mmol/L作为糖尿病造模成功的标准。……