韩 笑，刘希玲，文正华

（1.天津市种子管理站，天津 300061；2.津南区农业技术推广服务中心，天津 津南 300350；3.天津科润农业科技股份有限公司蔬菜研究所，天津 300384）

1 前言

花椰菜为十字花科芸薹属甘蓝的一个变种。目前，花椰菜商品种中大多数是F1杂交种，要使其整齐一致，就必须要求制种亲本高度纯合、稳定。常规的亲本获得途径是通过自花授粉和定向选择，需经6～8代，费时费工，且花椰菜多为自交不亲和。运用小孢子培养技术可以快速获得基因型纯合的双单倍体（DH）植株，加速育种进程，将品种培育年限缩短为3～4 a。

花椰菜小孢子的培养最早见于1992年，Duijs等首次报道了花椰菜小孢子的培养，2003年后我国也相继有了成功的报道。但与其它芸薹属作物相比,花椰菜游离小孢子培养比较困难。

本研究对花椰菜小孢子进行热激处理，期望提高小孢子胚胎的发生率，为育种工作服务。

2 材料与方法

2.1 材料

选择天津科润蔬菜研究所温室内花椰菜，于3～4月份取蕾进行试验。

2.2 方法

2.2.1 花蕾大小的选择

选择不同大小的花蕾，加一滴醋酸洋红染液，压片，于显微镜下观察，确定蕾长与小孢子发育时期的关系。选择单核靠边期小孢子比例较大的花蕾进行试验。

2.2.2 培养基配制

小孢子游离与清洗采用B5液体培养基 （表1），蔗糖浓度 13%，pH6.0，高压蒸汽灭菌 15 min。小孢子培养采用NLN液体培养基（表2），蔗糖浓度13%，pH6.0，先用0.8μm孔径滤膜抽滤，再在无菌条件下用0.22μm孔径滤膜抽滤除菌。胚状体的分化培养基采用MS固体培养基 （表3），蔗糖浓度3%，琼脂0.7%，1 mg/L 6-BA+0.01NAA+0.02IAA，pH5.8。……