陆奕宇 苏式兵

上海中医药大学中医复杂系统研究中心，上海 201203

乳腺浸润性导管癌（IDC），是一种常见、多发、严重威胁女性健康的恶性肿瘤。近年来发病率有明显的上升趋势，肿瘤的发生、发展是多因素、多步骤的复杂过程，在其发生、发展过程中伴随多种基因和蛋白的改变。相关研究表明，ER、PR、HER-2等生物分子标志物在乳腺癌的发生发展中发挥作用，对判断肿瘤的预后及指导内分泌治疗有重要的临床意义[1]。通过对生物标志物的研究，可以更深入地认识乳腺癌的生物学行为。

PAR-2属于PAR家族，为典型的七次跨膜G蛋白耦联受体。PAR-2是胰酶受体，可被体内多种内源性激活剂激活[2]。PAR-2在胃肠道、胰腺、肾脏、肝脏、前列腺等器官广泛表达[3]，同时在多种恶性癌症中[4-5]高表达。近年来的研究提示，PAR-2与肿瘤细胞的侵袭、转移关系密切。

P53基因是抑癌基因，分为野生型和突变型，野生型P53的半衰期很短，浓度很低，难以测出。突变型P53蛋白则半衰期延长，浓度增加，可用免疫组织化学方法测出。因此，一般测出的P53是突变型，P53阳性者预后较差。有50%的肿瘤带有P53基因突变，P53突变是乳腺癌发生的早期信号，并贯穿于乳腺癌的发展演变过程。

原癌基因HER-2也称为CerBb-2或Her-2/neu，是人类表皮生长因子受体（EGFR）家族的第2个成员。HER-2过表达会激活癌基因，促进肿瘤发生。HER-2通过与不同的EGFR配体作用后，表达水平及其活性发生变化，增加了肿瘤细胞的浸润和转移。目前HER-2已被公认为是与乳腺癌发生发展密切相关的原癌基因。

笔者采用组织芯片的免疫组化染色法检测PAR-2、P53、HER-2在乳腺癌组织的表达，并分析它们与临床资料的关系，探讨其在乳腺癌发生、发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

组织芯片（Od-CT-RpBre01）购自上海生物芯片公司。芯片具有76例乳腺浸润性导管癌患者的手术组织样本。所有乳腺癌病例均经HE染色病理检查确诊，患者均为女性，年龄31～80岁，中位年龄55岁。所有病例术前未接受化疗和放疗。

PAR-2鼠抗人单克隆抗体（SAM-11），Santa Cruz公司；P53 鼠抗人多克隆抗体（E-5），Santa Cruz公司；HER-2 兔抗人单克隆抗体（2242），Cell Signaling Technology公司；免疫组化试剂盒，DAKO公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化方法 采用免疫组织化学抗原热修复技术检测各蛋白表达。严格按照试剂盒操作说明进行，DAB显色。用枸橼酸高温高压法进行抗原修复。

1.2.2 免疫组化结果判断 染色结果判定参照Fromowitz等[6]的评分标准，无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性范围＜5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分；以上两项结果相加，分值≥2分判定免疫组化染色为阳性（+）。

1.3 统计学方法

采用统计软件SPSS 13.0对实验数据进行分析，计数资料以率表示，采用χ2检验或Fisher精确概率法。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PAR-2、P53、HER-2在浸润性乳腺癌组织的表达

76例病例中PAR-2阳性率为84.2%（64/76），P53阳性率为 43.4%（33/76），HER-2阳性率为 55.3%（42/76）。PAR-2、P53、HER-2在浸润性乳腺癌组织的表达见图1。

2.2 PAR-2、P53、HER-2与组织病理指标的关系

PAR-2、HER-2的表达与年龄、临床分期无关；P53的表达与临床分期有关（P=0.03）；PAR-2、P53的表达与组织学分级无关；HER-2的表达与组织学分级有关（P=0.034），阳性表达率越高者，越趋于肿瘤低分化；PAR-2、P53、HER-2的表达与肿瘤直径均无关；PAR-2的表达与淋巴结转移有关（P=0.022）。 见表1。

图1 PAR-2、P53、HER-2在浸润性乳腺癌组织的表达（×400）

表1 PAR-2、P53、HER-2与组织病理指标的分析结果

2.3 PAR-2与P53或HER-2联合与组织病理学指标的关系

PAR-2与P53同时表达为阳性的病例数占全部病例数的39.5%（30/76），且其阳性表达率与乳腺癌组织病理学分级显著相关（P=0.046）；PAR-2与HER-2表达为阳性的病例数占全部病例数的 53.9%（41/76），PAR-2（+）且 HER-2（+）病例组的阳性表达率与组织病理学分级有关（P=0.005），阳性表达率越高者，越趋于肿瘤低分化。PAR-2（+）且P53（+）病例组的阳性表达率与淋巴结转移虽然没有显著性差异，但仍有相关的趋势。见表2。

表2 PAR-2与P53或HER-2联合与组织病理学指标的关系

2.4 PAR-2与P53或HER-2表达的关系

在64例PAR-2阳性表达的乳腺癌患者中，P53阳性为30例；12例PAR-2阴性表达中，P53阴性为9例。在64例PAR-2阳性表达的乳腺癌患者中，HER-2阳性为41例；在12例PAR-2阴性表达中，HER-2阴性为11例。PAR-2与HER-2表达有关，差异有统计学意义（P=0.001）。见表3。

表3 PAR-2表达与P53或HER-2的关系

3 讨论

PAR-2与肿瘤细胞的侵袭、转移关系密切，但其引起肿瘤侵袭转移的具体机制尚不明确，可能与肿瘤细胞中存在大量活化的胰蛋白酶、基质金属蛋白酶、组织因子（tissue factor，TF）及表皮生长因子受体等相互作用有关。目前对其在肿瘤中的功能研究已有相关报道，如Su等[7]的研究表明PAR-2可能通过Gαi-c-Src-JNK-paxillin信号通路激活乳腺癌细胞并实现一系列功能。Fujimoto等[8]研究显示，PAR-2在胃癌中过表达，并且与肿瘤的淋巴结浸润相关，提示PAR-2与胃癌的进展有关。Jahan等[5]发现PAR-2在子宫颈癌中高表达，且生存率降低。关于PAR2和肿瘤转移，目前虽也有一定的研究，但认识不多。PAR-2在乳腺癌方面的研究目前国内尚无相关报道，国外亦仅有少量文献报道。

本研究中P53阳性率与组织学分级、肿瘤直径差异无统计学意义（P＞0.05），而与临床分期相关差异有统计学意义（P＜0.05）。但国内外文献关于P53表达与临床分期、组织学分级、肿瘤直径及ER、PR的关系报道并不一致[9-10]。因此，P53可作为判断其预后的一个指标，但目前仍认为其不是一个独立判断预后的指标，其临床意义需进一步研究探讨。

本实验研究显示，HER-2在乳腺癌组织中阳性表达率为55.3%，其阳性表达与组织学分级，PR表达有关，差异有统计学意义（P＜0.05），HER-2阳性表达率越高者，越趋于肿瘤低分化。相关研究显示，HER-2阳性与腋窝淋巴结转移、临床病理分期有关，其产物过度表达常提示恶性程度高、预后差[11]。

本研究中PAR-2的表达与临床分期、组织学分级、肿瘤直径无关，差异无统计学意义（P ＞ 0.05），与 ER、P53、HER-2的表达及淋巴结转移均相关差异有统计学意义（P＜0.05），提示PAR-2与ER、P53、HER-2在乳腺癌的发生、发展过程中可能存在着某种联系。已有文献提及PAR-2的表达与ER表达之间存在联系，Collier等[12]的研究中观察到，雌激素刺激后的MCF-7细胞中，随着ER表达的激活，PAR-2的表达也随之增加。50%～70%的乳腺癌患者有突变P53蛋白的表达，是乳腺癌重要的预后因素，目前有体外实验报道[13]TF刺激血管内皮细胞后，细胞内P53的表达增加，而TF能够与细胞因子Ⅶ结合后激活PAR-2[14]，来介导细胞信号转导。另有研究报道，P53可以直接调控PAR家族中的PAR-1，野生型P53能够抑制PAR-1的活化，同时突变型的P53可以激活PR-1功能。PAR-1与PAR-2同属PAR家族，它们在肿瘤转移中都扮演了重要的角色，同时亦有研究发现PAR-1和PAR-2之间也存在信号传导[15-16]，共同参与肿瘤的转移。上述研究提示PAR-2与P53可能通过TF或PAR-1等来实现某些肿瘤细胞功能。本研究中，PAR-2与HER-2之间的表达有关，但目前尚未有关于PAR-2与HER-2之间关系的研究报道。

综上，通过本实验发现PAR-2，P53，HER-2与乳腺癌某些临床病理指标之间具有相关性，但与以往文献报道结果仍有诸多不一致，仍需大样本前瞻性的临床研究来进一步证实它们在诊断乳腺癌以及指导治疗方面的临床价值。同时PAR-2与P53，HER-2表达上的相关性也揭示PAR-2在浸润性乳腺癌的发生发展过程中可能协同上述蛋白执行某些肿瘤细胞的功能。PAR-2能否作为未来乳腺癌诊断及治疗的靶标，它在乳腺癌中究竟扮演了什么样的角色?这些问题将在今后的研究中加以探讨。

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