杨 鑫，胡家俊，方尚玲

湖北工业大学工程技术学院，湖北武汉 430068

酵母菌的菌落与细菌有相像的特征，但酵母菌的菌落小而薄，酵母菌的菌落质地均匀，表面平整，粘稠，酵母菌的各个部位的颜色都很平均。酵母菌发酵所需的条件就是其生长发育和繁殖所需的条件，因为酒精发酵只有在酵母菌出芽繁殖的条件下才能进行，而当发酵停止得时候，酵母菌就会停止生长并死亡。

1 试验材料

1.1 样品

酿酒酵母：实验室冷冻保藏菌株。

1.2 培养基

液体YPD培养基；固体YPD培养基；TTC上层培养基；TIC下层培养基；发酵培养基；高渗再生完全培养基；渗透压稳定剂；蜗牛酶酶液；脱壁预处理剂

2 方法

2.1 酵母菌原生质体形成与再生条件研究

2.1.1 酵母菌原生质体制备[1]

在YPD培养基斜面上将菌株活化并分别接种于三角瓶中，30℃振荡培养至对数生长前期。将上述培养液3500r/min离心10min。为了尽可能的避免含有杂质，将使用无菌水冲洗离心。将亲本细胞悬浮脱壁预处理溶液中，振荡，离心收集菌体。将菌体悬浮于3mL的蜗牛酶液中，30℃振荡培养。对其原生质形态进行跟踪观察，当形成率达90%以上时，停止反应，收集原生质体细胞，对其进行离心和冲洗以后将细胞悬浮于渗透压稳定剂中。

2.1.2 酵母菌原生质体形成与再生条件正交试验

从表1可以知道酵母菌原生质体形成与再生的最佳条件是通过酶解时间，蜗牛酶浓度，选取脱壁预处理时间这三个因素的三水平正交试验得来的。

表1 正交试验因素水平表

2.1.3 酵母菌原生质体形成率与再生率[2]的计算