廉玉姬

临沂大学 生命科学学院，山东 临沂 276005

农业生物技术

白菜与甘蓝之间体细胞杂交种获得与遗传特性鉴定

廉玉姬

临沂大学 生命科学学院，山东 临沂 276005

为拓宽白菜育种的基因资源，改良白菜品质，以白菜 (Brassica campestris，2n=20，AA) 和甘蓝(B. oleraceaL. var.capitata，2n=18，CC) 的子叶和下胚轴为材料分离、制备原生质体。采用 40%聚乙二醇(Polyethylene glycol，PEG) 进行原生质体融合。融合细胞在以0.3 mol/L蔗糖、0.3 mol/L葡萄糖为渗透稳定剂，附加1.0 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L 6-苄氨基嘌呤 (6-BA) + 0.1 mg/L 1-萘乙酸 (NAA) + 1.0 mg/L激动素 (Kinetin，Kin) 的改良K8p培养基中培养并诱导细胞分裂。小愈伤组织经增殖培养后在MS + 0.2 mg/L玉米素 (Zeatin，ZEA) + 1 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L Kin + 0.4 mg/L NAA的固体分化培养基上诱导出不定芽。30 d后再转入MS基本培养基, 获得完整的再生植株。将生根的植株转移到花盆，并对其杂种性质进行形态学、细胞学和分子生物学鉴定。结果表明，经细胞融合分裂出的320个愈伤组织中，获得了35棵再生植株，其再生率达10.94%。形态学观察显示，绝大多数再生植株的叶面积较大，株型和叶型为两种杂交亲本的中间型，部分植株的叶片浓绿、肥厚。染色体计数结果显示，36.4%的再生植株染色体数为2n=38；36.4%的再生植株的染色体数为2n=58～60；27.2%的再生植株的染色体数为2n=70～76, 超过两个融合亲本的染色体数的总和。流式细胞仪测定DNA 含量显示，再生植株 DNA 含量变化比较大，其结果与染色体鉴定结果相吻合。随机扩增多态性 DNA (Random amplified polymorphic DNA，RAPD) 和基因组原位杂交 (Genomicin situhybridization，GISH) 分析结果证明再生植株具有双亲基因组。体细胞杂种花粉育性比较低，杂交、回交后其育性逐渐获得恢复，与白菜回交后代逐渐恢复了育性。通过体细胞杂交和回交、杂交获得了形态变化广泛的个体，为白菜的品种育种提供多样的种质资源。……