潘红玲，刘凤芹，冯永钦

（枝江市人民医院，湖北 枝江443200）

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）是一类氧化酶阳性的非发酵革兰阴性杆菌，是院内感染的主要病原菌之一，容易在ICU和神经外科、烧伤科、血液科、骨髓移植中心等医院科室进行播散并引起爆发性感染的条件致病菌。近年来，随着抗生素的滥用常引起医院感染的爆发和流行，且近年来发病呈上升趋势［1－3］。因此，进行铜绿假单胞菌临床分布分型研究，对指导临床合理用药和控制此菌耐药菌株上升有着十分重要的意义。现将本地区2年来所检出的240株铜绿假单胞菌的临床分布及基因分型情况报道如下。

1 材料与方法

1．1 菌株来源

240株铜绿假单胞菌分离于本院2009年1月—2010年12月期间住院患者送检的标本。标本类型包括痰、尿液、血液、伤口分泌物、脓液、引流液、胸水和腹水等。

1．2 试剂

氨曲南，环丙沙星，头孢吡肟，亚胺培南，头孢他啶，哌拉西林，哌拉西林／他唑巴坦，庆大霉素药敏纸片均购自OXOID公司；随机引物5，－GTTGGTGGCT－3，委托上海生物工程有限公司合成；细菌基因组DNA提取试剂盒、dNTP、100bp DNA Ladder、Taq DNA Polymerase均购自上海生物工程有限公司。

1．3 细菌鉴定

所有分离菌株的培养鉴定严格按照美国国家临床实验室标准委员会（CLSI）标准，采用BD全自动微生物鉴定系统对所有收集的菌株进行菌种鉴定。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。

1．4 RAPD分型

采用随机扩增多态性DNA（RAPD）基因分型进行细菌同源性鉴定

1．4．1 细菌DNA提取 用接种环挑取纯菌落接种于3ml LB肉汤培养液，将装有LB培养液的试管置于震荡培养箱中，37℃，140rpm／min，16－24小时培养至细菌生长对数期。……