侯吉光，张 奇，王红勇，贾晓晶，贾 杰

（1．吉林大学第二医院 放疗科，吉林 长春130041；2．吉林大学第二医院肿瘤 生物治疗科，吉林 长春130041；3．吉林大学中日联谊医院 电诊科）

细胞周期检测点激酶1（Chk1）是细胞周期检测点（G1／S、S和G2／M）中非常重要的蛋白激酶，它们通过信号传导和放大，调节下游靶蛋白表达，使细胞周期出现阻滞。抑制Chk1蛋白表达，可有效地消除肿瘤细胞在放射线或化疗药物作用后的细胞周期阻滞，抑制肿瘤放疗、化疗所导致的DNA损伤进行修复，从而增加放化疗的敏感性［1，2］。由于阻断剂技术本身存在诸多缺陷，这极大地限制其应用于临床肿瘤治疗［3，4］。而小片段干扰核糖核酸（small interferenceRNA，siRNA）技术能较好地解决应用阻断剂所带来的问题，从而可为肿瘤放射基因治疗研究提供新途径。本文在前期实验基础上应用chk1－536的RNAi载体转染Lewis肺癌细胞株，观察chk1－RNAi联合放疗对Lewis肺癌细胞株凋亡的影响。

1 材料与方法

1．1 材料 TR Izol Raegent、脂质体 LipofectimineTM2000、DMEM 培养基、胎牛血清，Invitrogen公司；MTT，Sigma公司。Lewis肺癌细胞株，本室保存。pGPU6／GFP／Neo－chk1－536，本室在前期工作中已经成功构建、鉴定、筛选［5］。

1．2 方法

1．2．1 转染Lewis肺癌细胞株 转染前：2－3×106个细胞接种于6孔培养板中，37℃，5%CO2孵箱中培养过夜，使细胞达80%融合，此细胞密度为细胞转染所必需。转染前用不含抗生素的无血清培养基洗两次，加0．8ml无血清且不含抗生素的培养基。转染：取1μg质粒DNA，加无血清且不含抗生素的培养基至100μl，同时用无血清且不含抗生素的培养基将10μl LipofectamineTM2000稀释至100μl，室温孵育5min。将这两种溶液缓慢混和，室温孵育10－15min，将此混和物加到细胞上，缓慢混和。……