刘汇，高晓晨

（1.吉林省延边朝鲜族自治州食品药品检验所，吉林 延吉 133000；2.长春中医药大学研发中心，吉林 长春 130117）

紫外分光光度法测定小儿化毒散中胆红素的含量

刘汇1*，高晓晨2

（1.吉林省延边朝鲜族自治州食品药品检验所，吉林 延吉 133000；2.长春中医药大学研发中心，吉林 长春 130117）

目的：建立小儿化毒散中胆红素的含量测定方法。方法：本实验采用紫外分光光度法测定胆红素的含量，用重氮化试剂显色，对样品的提取检测波长为533 nm。结果：胆红素浓度在0.010 3～0.050 0 mg·mL-1与吸收度呈良好的线性关系，r＝0.999 8（n＝5），平均回收率为99.33%，RSD＝0.54%（n＝6）。结论：该法简便、快速、稳定、可靠，可用于测定小儿化毒散中胆红素的含量。

小儿化毒散；人工牛黄；胆红素；紫外分光光度法

小儿化毒散收载于 《中国药典》2010年版一部，由大黄、冰片、人工牛黄、黄连、天花粉、珍珠、赤芍、川贝母等12味药组成，具有清热解毒，活血消肿功能，用于热毒内蕴、毒邪未尽所致的口疮肿痛、疮疡溃烂、烦躁口渴、大便秘结［1］。有报道对该药中的大黄素以及芍药苷进行含量测定［2-3］，其中人工牛黄含有效成分胆红素，其质量标准中未收载检测方法，且未见测定小儿化毒散中胆红素含量的相关文献报道。为能更好地控制本制剂质量，本文采用紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部附录V A）对胆红素进行含量测定［1］。

1 仪器与试药

1.1 仪器

紫外可见分光光度计（美国 Varian公司），BP211D型电子天平（德国Sartorius公司），电热恒温水浴锅 （江苏南通县通海电器厂）。

1.2 试剂

胆红素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：10077-0101），水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。小儿化毒散（广西南珠制药有限公司，批号：20100412，20100730，20100823，规格：0.6 g/瓶）。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取胆红素对照品10 mg置100 mL棕色量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5 mL置50 mL棕色量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。

2.2 供试品溶液的制备［4］

取装量差异项下的内容物，混匀，精密称取15 g装量的样品，置圆底烧瓶中，加三氯甲烷-乙醇（7∶3）混合溶液30mL、盐酸1滴，摇匀，置水浴65℃中加热回流30 min，放冷，过滤，至50 mL棕色量瓶中。容器用少量混合溶液洗涤，洗液并入同一量瓶中，加上述混合溶液至刻度，摇匀。精密量取上清液10 mL，置50 mL棕色量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。

2.3 测定波长的选择

精密量取胆红素对照品9 mL，置具塞试管中，精密加入重氮化溶液 （甲液：取对氨基苯磺酸0.1 g，加盐酸1.5 mL与纯化水适量使成100mL。乙液：取亚硝酸钠0.5 g，用纯化水溶解并稀释至100 mL，置冰箱内保存。临用时取甲液10 mL、乙液0.3 mL，混匀）1 mL，摇匀，在15℃暗处放1 h，以相应的试剂为空白，扫描，在400～800 nm波长范围内测定吸收光谱。结果胆红素对照品溶液在533 nm波长处有最大吸收峰，故以533 nm为测定波长，见图1。

2.4 标准曲线的绘制

精密量取2.1项下对照品溶液1，2，3，4，5mL，置试管中，分别加乙醇至9 mL，按2.3项下自 “精密加入重氮化溶液”起依法操作，相应试剂做空白，在533 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y＝6.441X+0.006 7，r＝0.999 8。胆红素浓度在0.010 3～0.050 0 mg·mL-1与吸光度呈良好的线性关系。

图1 胆红素的全波长扫描图

2.5 精密度试验

取供试品溶液，按2.3项依法重复测定6次吸光度，计算RSD＝1.17%。结果表明，本方法精密度良好。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液，分别于配制后0，3，6，9 h，按上述的方法测定吸光度，计算RSD＝1.08%，结果供试品溶液在9 h之内稳定性良好。

2.7 重现性试验

分别精密吸取供试品溶液6份，按2.3项下操作，测定吸光度，计算RSD＝0.37%。结果表明，此方法有较好的重现性。

2.8 回收率试验

精密称取样品细粉约1瓶总量，置圆底烧瓶中，按2.2项下方法制备溶液6份，加胆红素对照品0.05 mg，在533 nm波长处测定其吸光度，计算胆红素平均回收率，结果见表1。

2.9 样品测定

取3批小儿化毒散（批号：20100412，20100730，20100823），每批一瓶样品，按2.2项下方法平行制备3份供试品溶液，根据测定出的吸光度和标准曲线，测定含量，结果平均含量分别为41.7，42.3，42.1μg/瓶。

表1 小儿化毒散中胆红素回收率试验

3 讨论

按方法同时制备空白样品溶液，在400～800 nm的波长范围内扫描，无紫外吸收，不干扰胆红素的含量测定，故选择533 nm波长作为胆红素含量测定的检测波长是合理的。

小儿化毒散的原标准中无人工牛黄的含量测定，不能完整地控制该药品的质量。经多次测定，小儿化毒散中胆红素的含量限度不低于41.4μg/瓶。通过上述方法学考察，建立了小儿化毒散中胆红素的含量测定方法，该方法简便快捷，结果准确，重现性、回收率好，能有效控制小儿化毒散中人工牛黄的质量。

［1］国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京：中国医药科技出版社，2010：478，附录 30.

［2］黄泽中，何利华，尹雄章.小儿化毒散中芍药苷含量测定［J］.医药导报，2012，31（7）：916-917.

［3］孙新建，李志浩，吴进，等.RP-HPLC测定小儿化毒散中大黄素和大黄酚的含量［J］.中医药导报，2010，16（10）：93-95.

［4］吴春敏，谢敏.紫外分光光度法测定片仔癀中胆红素的含量［J］.中成药，1995，17（6）：14-15.

UV Spectrophotometry Determ ination of Bilirubin in Xiao’er Huadu Powder

LIU Hui1，GAO Xiao-chen2
（1.Institute of Food and Drug，Yanbian Korean Autonomous Prefecture，Yanji133000，China；2.Development Center of Traditional Chinese Medicine and Bioengineering，Changchun University of Chinese Medicine，Changchun130117，China）

Objective：A method of determination of bilirubin in Xiao’er Huadu Powder.Methods：The content of Bilirubin in Bovis Calculus Artifactus was determined by UV spectrophotometry.The detection wavelength was 533 nm.Results：The linear ranged over 0.010 3～0.050 0 mg·mL-1（r＝0.999 8，n＝5）.The average recovery was 99.33%（RSD＝0.54%，n＝6）.Conclusion：The methods were proved to be simple，precise sensitive and reproducible.It can be used for quality control of Xiao’er Huadu Powder.

Xiao’er Huadu Powder；Bovis Calculus Artifactus；Bilirubin；UV spectrophotometry

2012-11-29）

*［通讯作者］刘汇，Tel：（0433）2265069，E-mail：liuhuiw5＠hotmail.com