分蘖洋葱ISSR-PCR扩增体系的建立
2012-09-20刘淑芹吴凤芝刘守伟
刘淑芹,吴凤芝,刘守伟,潘 凯
(东北农业大学园艺学院,哈尔滨 150030)
分蘖洋葱(Allium cepa L.var.multiplcans Bailey syn.var.Agrogatum Don)为葱科(Alliaceae)葱属(Allium)草本植物,又称毛葱、珠葱,一年生草本葱蒜类蔬菜,是洋葱种质资源重要组成部分[1]。鳞茎中含有特殊辛辣味的挥发性硫化物,具有杀毒消菌作用[2],种植面积逐年增加。但是现有栽培的分蘖洋葱多为表现良好的品系或农家品种,应用于生产推广的品种很少,加之分蘖洋葱为营养体繁殖,每年种用毛葱的存贮问题,费工费力,效果不佳,在生产上也限制其大面积推广[3]。因此,加速分蘖洋葱的品种筛选与鉴定,促进新品种的繁育以及杂交亲本合理选择选配,进而实现分蘖洋葱种子繁殖是解决问题的关键。而了解分蘖洋葱的遗传背景和DNA指纹图谱构成,确定不同品种的遗传多样性,明确分蘖洋葱资源的亲缘关系和分类地位,是实现这一目标的必要前提。
ISSR(Inter simple sequence repeat)是利用一条包含简单重复序列,并在3'或5'端锚定的寡聚核苷酸引物,对SSR(微卫星)之间一段短DNA序列进行PCR扩增的一种新型分子标记技术[4-7]。由Zietkiewicz等提出并逐渐应用开来,为显性标记,符合孟德尔式遗传规律。相对SSR等其他分子标记方法,操作技术比较简单,获得结果快、成本低[7],加之其具有分布广泛且变异快的特点,ISSR标记较其他分子标记方法可获得更多基因位点的差异。这些特点使其产生后迅速发展,近年来在多种作物中都有应用,例如水稻、茄子、小麦、柑橘、松树等[8-12],为作物的DNA指纹图谱构建、遗传多样性分析、特殊基因定位、核心种质保存利用等提供强有力的分子生物学理论基础和技术支撑。……
