越橘果实总RNA提取方法比较研究
2012-09-20裴嘉博李晓艳李亚东
东北农业大学学报 2012年10期
裴嘉博,李晓艳,李亚东
(吉林农业大学园艺学院,长春 130118)
从不同组织和器官中提取纯度高、完整性好的RNA是进行Northern分析、实时定量PCR、cDNA文库构建和新一代测序(如454 pyrosequencing和Illumina sequencing)等许多分子生物学研究的必要前提。但是由于植物种类繁多,次生代谢物质复杂,导致很难有一种通用的方法来提取不同植物组织中的RNA。尤其是许多植物果实组织中富含多糖和酚类化合物,而且RNAase(核糖核酸酶)水平较高,这些因素使得从果实中提取高质量RNA十分困难[1-3]。目前已经从葡萄[4]、猕猴桃[5]、香蕉[6]、苹果[5]和柿[7]等的果实中提取到高质量的RNA,但以越橘(Vaccinium corymbosum L.)果实为材料进行RNA提取的文章尚未见报道。
越橘果实富含多糖多酚,尤其是花色素苷的含量在众多水果和蔬菜当中高居榜首[8-9]。对越橘花色素苷合成途径的一些关键酶基因进行克隆分离及通过实时定量PCR研究其在不同组织中表达的特异性,是了解越橘花色素苷合成分子机制的主要方法,而提取高质量的RNA是这一系列后续试验的前提和基础。本试验以越橘成熟果的果肉和果皮为试材,采用市售经典的适合多糖多酚植物RNA提取试剂盒、Trizol试剂法和改良的CTAB法提取越橘果实组织总RNA。以探索和研究最适于越橘果实的总RNA的提取方法。
1 材料与方法
1.1 材料
以越橘品种北陆为试材,来源于吉林农业大学小浆果试验基地。成熟果实(花后50 d)采收后快速将果肉和果皮剥离,并分别置于液氮中速冻,于-80℃低温冰箱保存备用。
1.2 果实总RNA的提取
试验所用到的研……
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