草鱼呼肠孤病毒VP5蛋白的表达与纯化
2012-09-19方珍珍景宏丽江育林张利峰张旻李华
方珍珍,景宏丽,江育林,张利峰,张旻,李华
(1.大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室,辽宁大连116023;2.天津农学院水产科学系,天津300384;3.中国检验检疫科学研究院,北京100029;4.北京出入境检验检疫局,北京100026)
草鱼出血病是一种具高度传染性和致死性的病毒性鱼病,该病流行于中国各地草鱼养殖区,尤以长江流域和广东、广西、福建最为普遍,死亡率高达80%,严重影响了草鱼Ctenopharyngodon idellus养殖业的发展。1972年首次报道该病,1978年确定为病毒病,1980年首次在病鱼的头肾切片中观察到呈晶格状排列的病毒粒子,1984年确定草鱼出血病病原为呼肠孤病毒[1-2]。草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)是中国分离、鉴定的第一株水生动物病毒,对该病毒的形态学、生物学、流行病学、理化及分子生物学等方面已进行了系统的研究[3-8]。
草鱼呼肠孤病毒的基因组由11个dsRNA片段组成,不同的毒株间病毒基因组的总分子质量差异不大 (相对分子质量约15×106),但各片段分子质量有所差异。近年来,方勤等[9]通过序列分析和三维结构研究表明,成熟的GCRV颗粒由7种结构蛋白和4种非结构蛋白组成,其中病毒蛋白VP5和VP7构成了病毒的外层衣壳组分。通过蛋白酶裂解试验揭示了VP5和VP7在病毒感染及致病中起着不可替代的作用。此外,VP5还可进行构象的改变,其作用是保证膜穿透[10-12],同时VP5也是GCRV的衣壳蛋白,可能具有较高的免疫原性。
关于草鱼出血病的检测,电镜观察是最直观而有效的方法,在最初的研究中应用较多,但是存在着技术和仪器要求以及样品制备复杂等问题[13]。……
