刘祥

乳腺癌的发展是一个复杂的生物学过程，包括癌基因的激活、抑癌基因的失活以及调节凋亡、粘附和血管生成相关基因的缺陷等[1-3]。NDRG2是一种抑癌基因，在多种肿瘤组织和肿瘤细胞系中表达下调。

1 材料与方法

1.1 材料 乳腺癌细胞系T47D、MCF7、MDA-MB-453、MDA-MB-231均购自武汉大学典型培养物典藏中心。质粒pcDNA3.1-NRDG2为本实验室构建并测序正确。anti-NDRG2单克隆抗体购自cell signaling公司，anti-beta actin及HRPIgG抗体购自博士德公司。

1.2 方法 Western blot：将胰蛋白酶消化的5×106个细胞用PBS洗2遍，裂解0.5 h后，4 ℃离心10 min，取上清，加入缓冲液，煮沸。将待测蛋白电泳，转膜，封闭非特异性抗体。然后分别加入鼠抗人NRDG2T抗体，4 ℃过夜。次日用TBST洗3遍后，再分别加入HRP标记的抗鼠二抗，室温孵育2 h，ECL显色。

2 结果

2.1 各种乳腺癌细胞系中NDRG2的表达 收取常规培养的乳腺癌细胞系，检测mRNA水平及蛋白水平NDRG2的表达，MDA-MB-453和MDA-MB-231细胞中NDRG2的表达较低(图1)。

图1 各种乳腺癌细胞系中NDRG2的表达

2.2 转染pcDNA3.1-NRDG2后，MDA-MB-453细胞中NDRG2的表达 MDA-MB-453细胞系转染pcDNA3.1-NRDG2后，NRDG2的表达在mRNA水平及蛋白水平均升高(图2)。

图2 转染pcDNA3.1-NRDG2后，MDA-MB-453细胞中NDRG2的表达(1.Blank；2.pcDNA3.1；3.pcDNA3.1-NRDG2)

2.3 高表达NRDG2后，细胞生长曲线 将MDA-MB-453细胞经苔盼兰染色，细胞计数并绘制生长曲线，高表达NRDG2的细胞生长速度明显低于NRDG2低表达的细胞 (图 3)。

图3 高表达NRDG2后，细胞生长曲线(1.Blank；2.pcDNA3.1；3.pcDNA3.1-NRDG2)

3 讨论

本实验检测了不同恶性程度的乳腺癌细胞系，发现NRDG2表达水平与细胞的恶性程度有一定关系。另外，通过脂质体转染法在MDA-MB-453细胞系中高表达NRDG2，发现细胞的生长明显减慢。该实验提示NRDG2在乳腺癌细胞系中各有不同，且NRDG2影响了乳腺癌细胞的生长。此实验为针对NRDG2信号通路进行乳腺癌的有效分子治疗提供了可靠证据。

[1] N.C.Popescu，D.B.Zimonjic.Chromosome and gene alterations in breast cancer as markers for diagnosis and prognosis as well as pathogenetic targets for therapy[J].Am.J.Med.Genet，2002，115(3):142-149.

[2] C.M.Perou，T.Sorlie，M.B.Eisen，et al.Molecular portraits of human breast tumours[J].Nature，2000，406(6797):747-752.

[3] F.Lerebours，R.Lidereau.Molecular alterations in sporadic breast cancer[J].Crit.Rev.Oncol.Hematol，2002，44(2):121-141.