汤倩倩，李 明*，李守勉，田景花，周晓东，陈苗苗

（河北农业大学 园艺学院，河北 保定 071001）

同工酶技术已被广泛应用于食用菌遗传育种和分类鉴定，酯酶同工酶是同工酶研究中最稳定、易检测的酶系统之一[7]，酯酶同工酶技术已应用到杏鲍菇菌株之间遗传分析、亲缘关系分析以及杂交菌株的鉴定上[8-10]。通过对杏t菌株的单核菌丝诱变杂交获得新的子代菌株，并将亲本杏t与子代菌丝进行酯酶同工酶电泳分析，筛选出具有较强杂种优势的子代新菌株，为菌丝体和子实体阶段的进一步筛选提供材料。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌株

杏t，由河北农业大学食用菌研究室保藏。

1.1.2 培养基

PDA培养基：土豆 （去皮）200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g、水1 000 mL，pH自然母种培养基：棉籽壳200 g、土豆 （去皮）100 g、麸皮 20 g、葡萄糖20 g、蛋白陈5 g、琼脂20 g，水1 000 mL， pH自然

1.2 方法

1.2.1 单孢稀释分离及诱变处理

采摘八成熟的杏t子实体收集孢子，用连续稀释法分离孢子，孢子悬浮液浓度约为106个·mL-1，用玻棒均匀涂于PDA平板培养基上，25℃恒温培养。待孢子刚刚萌发，置于30W紫外灯正下方30 cm处进行诱变处理，照射时间分别为10 s、 30 s、 1 min、 1.5 min、 2 min、 3 min，再于25℃黑暗条件下继续培养3 d~5 d。

1.2.2 配对杂交

经诱变的单孢子暗培养后，选择发育良好的单核菌丝，两两配对接种于PDA平板培养基上，相距1.0 cm~1.5 cm，25℃培养9d左右，待菌丝接触后，挑取交界处部分菌丝镜检，若有锁状联合则转接于斜面母钟培养基上培养，淘汰菌落形态不均一，生长较弱的菌株。

1.2.3 拮抗试验

在母种平板培养基上接种亲本和杂交子代菌丝体，两者相距4 cm，25℃恒温培养，观察是否有明显拮抗线产生。……