马 明 飞，李 树 金，金 凤 燮，鱼 红 闪

（大连工业大学 生物工程学院，辽宁 大连 116034）

0 引言

人参中的主要有效成分是人参皂苷［1］，但含量较高的皂苷成分不一定是活性最高且结构最佳的，而稀有皂苷含量极少，却易被人体吸收，并且具有更高的生理活性。人参皂苷葡萄糖苷酶可以将人参中含量高的皂苷转化为活性更高的微量成分皂苷。关于人参皂苷葡萄糖苷酶的报道，多来自于本实验室，国内外相关的研究较少。本实验室长期研究能水解人参皂苷糖基的、特异的人参皂苷糖苷酶类［2］，并筛选出产人参皂苷葡萄糖苷酶的微生物Absidiasp.G8r，又对人参皂苷葡萄糖苷酶进行了分离、纯化，并研究了其基本的酶学特性［3-4］。但是从分子生物学水平上研究人参皂苷葡萄糖苷酶基因的克隆和表达，国内外尚未见报道。本实验室前期已成功从产人参皂苷葡萄糖苷酶的微生物Absidiasp.G8r菌中调取出了人参皂苷葡萄糖苷酶的基因全序列，全长为2 149bp，CDS区全长为1 923bp，共编码640个氨基酸，理论分子质量约为71ku［5］。本实验将编码人参皂苷葡萄糖苷酶成熟肽的cDNA 片段克隆到大肠杆菌表达载体pET32a（+）中，构建了含有人参皂苷葡萄糖苷酶基因的重组质粒。将该重组质粒转化至E.coliBL21（DE3），通过对重组蛋白进行变性、复性处理，进行了薄层层析法和SDSPAGE 法的定性和定量分析，进一步确定了所调取的人参皂苷葡萄糖苷酶基因序列的正确性。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 菌株和质粒E.coliBL21（DE3）和pET32a（+），购自宝生物工程（大连）有限公司。

1.1.2 试剂与工具酶……