全晓毅

青海省贵南县兽医站，青海贵南813100

受精卵冷冻保存和解冻后移植是家畜体外授精技术应用于生产的关键环节。家畜的种类、受精卵发育阶段、冷冻剂和解冻剂的选择、冷冻和解冻的温度和速度等，均会影响受精卵的成活率和囊胚发育。本文就影响冷冻绵羊受精卵解冻后生存性的主要因素加以讨论，探索绵羊受精卵的冷冻保存及解冻后移植的有效途径。

1 经冷冻的绵羊受精卵解冻后生存性的研究概况

1974年Willadsen等①最先发表移植冷冻保存绵羊受精卵并获得受胎的报告。Willadsen等在绵羊受精后第5～8天采取受精卵，用1.5mol／L的二甲基亚砜（DMSO）以0.3℃／min的速度降温；在液氮中保存0.5～30.0d后，用12.0℃／min的速度解冻；将18个受精卵为11只绵羊移植，在移植后的第3个月检查，确定7只受胎。Smorag①将15个受精卵进行冷冻和解冻，为8只绵羊移植，其中4只受胎，且产了5只羔羊。王志清等［1］在绵羊受精后第5～7天采取具16个胚囊的受精卵，用1.5～2.0 mol／L的DMSO作抗冻剂，以0.21～1.00℃／min的速度降温到－76℃，在液氮中保存4～21d；再以4℃／min和12℃／min的速度解冻，检查发现保存的21个受精卵大部分变性。

2 保存液和抗冻液

采取受精卵用保存液处理10min后，移入冷冻保护液中平衡20min，再放入有少量保存液的小试管、安瓿或塑料细管中，并置胚胎冷冻机中进行冷冻。冷冻保存受精卵用的抗冻剂以1.5～2.0 mol／L的DMSO 为主，甘油用1.0mol／L。在小白鼠、大白鼠和田鼠受精卵的冷冻保存中，用乙二醇或二甲基甲酰胺作抗冻剂，与DMSO有同样的效果。1984年Tervit等①在研究中发现，乙二醇作为绵羊冷冻保护剂的冷冻效果明显优于甘油。……