唐兆华 廖正步 支兴刚 谢延风 石全红 何朝晖 詹彦

脑水肿是颅脑创伤、缺血性脑卒中等众多神经系统疾病共同的病理过程。颅脑疾病常常伴发的神经细胞缺血缺氧则是引起脑水肿的最重要病理基础之一。促红细胞生成素是血液系统主要的造血因子。近年国内外及本课题组前期的体外研究发现，重组人促红细胞生成素(recombinanthuman erythropoietin，rhEPO)在神经系统中具有减轻创伤性脑水肿等重要的神经保护功能[1-4]。新近研究显示水通道蛋白 4(aquaporin4，AQP4)是中枢神经系统最丰富的水通道蛋白，在脑内水电解质平衡的调节上发挥着重要作用[5-6]，而且已有最新研究表明rhEPO可以调节AQP介导的体外星形胶质细胞水通透性的改变[4]。星形胶质细胞是脑组织中占绝大多数比例的神经细胞，它的水肿会造成严重的脑损害[7]。所以，本研究旨在观察rhEPO预处理对氧糖剥夺后星形胶质细胞水肿及其AQP4表达的影响，并探讨其意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象 新生2 d内的SD大鼠(重庆医科大学实验动物中心提供)50只，胎牛血清(美国Gibco)，无糖DMEM培养基(中国 钮因华信)，神经胶质原纤维酸性蛋白(美国Sigma)，乳酸脱氢酶试剂盒(美国 Hyclone)，RT-PCR试剂盒(美国 Ferments)，AQP4 多克隆抗体(美国 Santa Cruz)。

1.2 星形胶质细胞原代培养[8]取新生2 d内的SD大鼠，取大脑皮层剪碎并消化后，接种到培养瓶中，置于37℃，20%O2的孵箱1 h，将细胞悬液换至有多聚赖氨酸涂底的培养瓶，隔2 d换液，7 d后 37℃，180 r／min 水平振荡 10 h，换液，细胞长满至95%瓶底后传代，待培养至第三代时，用特异性GFAP对星形胶质细胞行免疫荧光染色，鉴定成熟、纯化的星形胶质细胞。……