郭春梅，刘淑清，孙明忠*

1大连医科大学生物技术系;2大连医科大学生物化学教研室，大连 116044

蛇毒(snake venom，SV)是由生物活性多肽、蛋白(酶)、核苷和金属离子等组成的混合物，是自然界中最丰富最集中的蛋白(酶)源之一。SV蛋白(酶)具有抗凝止血、镇痛、影响血小板聚集、诱导出血或溶血、诱导细胞凋亡、刺激水肿形成、抗病毒、抗肿瘤、抗菌消炎、抗HIV活性等多种生物学活性。从各类SV中得到的蛋白(酶)，已被广泛作为基础理论研究的工具酶，以及临床血液类疾病药物、神经毒素镇痛药、抗癌药物、止血类药物和降压类药物，此外，蛇毒组分还被应用于艾滋病防治和异种心脏移植排斥作用研究中。目前研究较多的SV组分是:神经毒素、细胞毒素、神经生长因子、类凝血酶、纤溶酶源激活物、磷脂酶 A2和 L-氨基酸氧化酶［1-7］。

L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase，LAAO，EC 1.4.3.2)是一种典型的核黄素酶，多为由两个约60 kDa相同亚基组成的二聚体分子，能专一性催化氧化L-氨基酸，生成相应的(α-酮酸和氨，并释放过氧化氢(H2O2)(Fig.1)。LAAO广泛存在于细菌、真菌、藻类和动植物中，与氮源利用和转化有关。SV-LAAO在蝰科、响尾蛇科以及眼镜蛇科中广泛分布，含量高、酶活性强(比哺乳动物酶活性高400多倍)，易纯化，便于研究。SV-LAAO通常是黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)或黄素单核苷酸(FMN)结合的糖蛋白同源二聚体分子，通过催化氧化L-氨基酸产生H2O2，与蛇毒活性和毒性密切相关［1-7］。不同蛇毒LAAO在分子量、稳定性、底物特异性、与血小板作用、诱导出血、促进肿瘤细胞凋亡和抗菌活性等方面差异很大［1，7-9］。在 20 世纪 90 年代前，对 SVLAAO研究局限于酶学和生化性质［7］，被用来确证氨基酸的光学异构体、由L-氨基酸制备α-酮酸和由3，5-二碘酪氨酸生产甲状腺素［1，6，8-12］。但近年来研究发现，SV-LAAO具有调控血小板聚集、刺激水肿形成、诱导出血或溶血、抗病毒、抗菌消炎、诱导细胞凋亡、抗病毒/HIV活性以及抗寄生虫活性等，具有潜在的巨大药物开发价值和临床应用前景，从而重新获得了研究者的青睐。

本文主要综述了近10年来SV-LAAO在影响血小板聚集、诱导细胞凋亡、细胞毒性、抑菌活性和抗病毒/HIV活性等方面的独特生物学作用及其相关作用机制。

图1 LAAO的催化反应Fig.1 Reaction catalyzed by LAAO

1 SV-LAAO酶学特性

LAAO在蛇毒中约占蛇毒总蛋白的1% ～9%，含量最为丰富的是响尾蛇，其次是蝰蛇科和眼镜蛇科［12，17，18］。海蛇中存在这种酶，但活性低。不同蛇毒LAAO的活性、含量及同工酶谱差异很大。

大多数SV-LAAOs呈现热不稳定性;SV-LAAO失活也与缓冲液离子强度和pH有关，反复冻融会影响酶活性。一般在4℃、中性pH条件下可长期保持SV-LAAO活性。在－5℃ ～－60℃会使酶失活，最易失活温度为 －20 ℃［3，19-21］。不同 SV-LAAO对温度敏感性不同，在50℃以上一般可使所有SVLAAOs失活;Agkistrodon halys blomhoffii LAAO在－80℃保存6个月仍保持其活性［12］。pH值改变也会引起 SV-LAAO失活，多数情况下，失活 SVLAAO在pH 5.0条件下加热恢复活性;一价阴离子如氯离子可延缓其失活［19，20，22］。Naja naja oxiana LAAO(NA-LAAO)可经受冷冻而保持活性，但反复冻融会影响其结构，进而影响其与血小板的相互作用［18］。Apoxin I在70°C保温10 min或反复冻融，会消除酶活性和诱导细胞凋亡活性［23］。在 SVLAAO失活过程中其辅基FAD仍然存在，但其吸收光谱及旋光色散光谱会产生细小变化，其失活可能由FAD构象变化所致。由于 FAD的存在，SVLAAO在465、380和280 nm处有典型特征吸收峰［1，13，14，24-26］。SV-LAAO 失活伴随 FAD 最大吸收峰波长迁移，可根据此变化判断酶的失活。

多数SV-LAAOs对疏水性和芳香族氨基酸有很高亲和力，如苯丙氨酸(L-Phe)、色氨酸(L-Trp)、缬氨酸(L-Ile)、蛋氨酸(L-Met)和亮氨酸(LLeu)［7，16，27］。Ophiophagus Hannah LAAO 最适底物为 L-Lys，Bungarus fasciatus LAAO(BF-LAAO)最适底物为 L-Asp 和 L-Glu［28］。

不同SV-LAAO底物结合特异性差异源自结合位点的不同，其催化差异可能因为其侧链结合位点不同造成。一般认为SV-LAAO有一个氨基酸侧链结合位点，由3-4个疏水的亚位点组成;而O.hannah LAAO还有另一结合位点用来结合LLys［16，26-28］。

2 SV-LAAO结构特征

2.1 SV-LAAO基本结构特征

SV-LAAO通常是通过非共价键结合的同源二聚体糖蛋白［7，19-21］，BF-LAAO 则被报道是一个单体蛋白［28］。SV-LAAO等电点(pI)差别很大，在 4.4-8.5 间;并存在同功酶。Bothrops jararaca［8］，Bothrops alternatus［14］，Pseudechis australis，Vipera berus berus［20］和 Agkistrodon blomhoffii ussurensis［29］蛇毒中存在LAAO同功酶现象。另外，一种蛇毒中可同时含有酸性、碱性和中性的LAAOs，这主要由蛋白翻译后修饰所致或者由不同基因合成而来。SV-LAAO酸碱度不同是否呈现不同药理学特性，尚需深入研究阐明。

Crotalus adamanteus，Crotalus atrox，Calloselasma rhodostoma，Agkistrodon halys blomhoffii，Trimeresurus stejneggeri和Bothrops moojeni六种蛇毒的LAAOs的cDNA被克隆和分析，它们的氨基酸序列相似性＞80%［1］。但SV-LAAO氨基酸序列与细菌、真菌的LAAO序列相似性很小，仅在FAD结合位点区域上与人单胺氧化酶、细菌和真菌的LAAOs具较高序列相似性;SV-LAAO和白介素4诱导的大鼠Fig.1蛋白序列相似性稍高，大于30%。

Calloselasma rhodostoma和Agkistrodon halys pallas LAAOs晶体结构表明，LAAO和D-氨基酸氧化酶(DAAO)底物结合位点是对映体关系［7，21］。Calloselasma rhodostoma蛇毒的LAAO功能性结构是双体形式，每一单体包括三个结构域:FAD结合结构域、底物结合结构域和螺旋结构域。SV-LAAO底物结合结构域和螺旋结构域形成一个底物进入并与活性位点结合的通道，允许底物进入和产物释放［3，26，30，31］;SV-LAAO 的 FAD 结合结构域与人类、细菌和真菌的相似，对酶活性非常重要。

2.2 SV-LAAO是糖基化蛋白

多数 SV-LAAOs是糖蛋白［3，31］。Calloselasma rhodostoma LAAO 结构表明［3，31］:该酶有 Asn 172 和Asn 361两个N-糖基化位点;Geyer确定连接糖链为唾液酸，其在该LAAO诱导细胞凋亡、抗菌等方面起重要作用［31］。Torii等人发现apoxin 1去除糖链后其催化活性完全消失［23］;采用PNGase F去除糖基后，Agkistrodon halys pallas LAAO活性降低75%，说明糖基化在调节酶活和生物活性中起作用［32］。但糖基去除对来源于 Bothrops Pauloensis［1］，Bothrops jararaca［8］，Bothrops alternatus［14］和 Bothrops moojeni［24］蛇毒的LAAO活性无影响，不是生物活性必需的。因此，SV-LAAO糖基化的具体作用，其是否具有特异性，有待进一步研究。

2.3 SV-LAAO是金属离子结合蛋白

本课题组从Agkistrodon blomhoffii Ussurensis蛇毒得到了Akbu-LAAO［29］，采用电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)［29，33-36］发现 Akbu-LAAO是含Zn2+蛋白，每个二聚体蛋白含有4个Zn2+，首次报道了SV-LAAO是金属离子结合蛋白。进一步实验结果表明:Zn2+的去除不影响Akbu-LAAO的水解活性，但可导致其构象改变而使Akbu-LAAO最大发射荧光强度降低61%。Zn2+对Akbu-LAAO水解活性不是必需的，但有助于保持Akbu-LAAO结构完整性。另外，某些外源金属离子Mg2+、Mn2+、Ca2+、Ce3+、Nd3+、Co2+和 Tb3+可显著提高 Akbu-LAAO 水解L-Leu活性，其中Tb3+影响效果最强，使 Akbu-LAAO水解活性提高约2倍，Mg2+增加其50%的水解活性;Ni2+、La3+、Gd3+、Fe2+、Cu2+和 Eu2+/Eu3+对Akbu-LAAO水解L-Leu活性影响不明显［29］。

3 SV-LAAO的生物学活性

3.1 对血小板作用

心血管疾病严重威胁人类健康，死亡率居首位。抗血小板治疗是该类疾病防治的一个重要方面，但目前此类临床药物少且具有副反应。SV-LAAO对血小板有明显作用［1，10-14，17，18，22，25，29，32，37］，但其对血小板的作用存在争鸣:有些SV-LAAOs抑制由诱导剂引起的血小板聚集，而有些SV-LAAOs则能诱导血小板聚集。不同来源SV-LAAO对血小板聚集相反的作用可能由酶活性高低差异导致，但目前尚无人对其活性作出统一性比较。一般认为H2O2在SV-LAAO对血小板作用中发挥重要作用，历来是该领域研究重点。

3.1.1 SV-LAAO对血小板聚集的促进作用

Bothrops Pauloensis［1］，Trimeresurus jerdonii［11］，Trimeresurusmucrosquamatus［13］， Bothropsalternatus［14］，Eristocophis macmahoni［17］，Bothrops atrox［22］，Crotalus durissus cascavella(Casca LAAO)［25］和 O.Hannah蛇毒 LAAOs能促进血小板聚集。Casca LAAO促进人血小板聚集，并呈剂量相关性;Pignatelli等人认为ADP和凝血酶不会激发H2O2的形成，但H2O2却参与胶原(collagen)诱导的血小板聚集;二者促进血小板聚集作用被过氧化氢酶(catalase)消除，即其诱导的血小板聚集需要环氧合酶的参与，而H2O2可能作为第二信使在血小板聚集过程中发挥作用。O.hannah蛇毒LAAO能诱导富含血小板血浆发生血小板聚集，该作用不依赖于ADP释放。也有研究表明SV-LAAO促进血小板聚集可能通过受体依赖通路激活血小板而发挥效应。总之，SV-LAAO可能通过以上一种或几种作用机制诱导血小板的聚集，其具体作用机制需深入研究。

从认知难度上看，分数和小数形式的数的理解要远比整数困难．因此，RJ版教科书有理数章节的例题可以根据知识理解的难易程度来适当调整各形式例题的比重，改变目前以整数为主的例题形式，适当增加分数和小数形式考查有理数的例题比重，帮助学生更好地理解难点．

3.1.2 SV-LAAO对血小板聚集的抑制作用

来自 Echis colorata，Naja naja kaouthia［10］，Agkistrodon halys blomhoffi［12］，Naja naja oxiana［18］，Vipera berus berus［20］，Agkistrodon blomhoffii ussurensis［29］，Agkistrodon halys Pallas［32］，Vipera lebetina［37］和Daboia russellii siamensis蛇毒的 LAAOs能抑制ADP、胶原和TMVA等诱导的血小板聚集。Daboia russellii siamensis LAAO(DRS-LAAO)抑制由 ADP和TMVA诱导的血小板聚集呈剂量相关性。Agkistrodon halys blomhoffii M-LAAO，呈剂量依赖性地抑制高切力和低切力诱导的血小板聚集;并且L-Leu大量存在时，该LAAO能显著提高其抑制低切力引起的血小板聚集作用，而对高切力引起的血小板聚集无明显作用;而当catalase存在时，其抑制作用被清除［12］。这说明H2O2在SV-LAAO抑制血小板聚集中可能起重要作用，该作用并受血小板聚集程度和强度的影响［12］。Sakurai等人得到了相同的结果:眼镜蛇毒K-LAAO抑制低切力诱导的血小板聚集作用明显强于高切力诱导的聚集，其作用和单纯由H2O2作为血小板抑制剂作用相似［10］。Tonismagi等人也发现Vipera lebetina蛇毒LAAO抑制由ADP、collagen诱导的血小板聚集明确与其催化产生的H2O2密切相关［37］。本课题组得到的 Akbu-LAAO，在其浓度为66.7 μg/mL时对ADP诱导的兔和人血小板聚集的抑制率为73.6%和30.3%，但不同的是，其抑制效应无明显剂量相关性，说明不同蛇毒LAAO作用的差异性;另外，Akbu-LAAO对人和兔血小板聚集抑制作用有显著差别，以动物血小板代替人血小板进行类似实验，有一定风险，所得数据可能有失偏颇［29］。

3.1.3 SV-LAAO对血小板作用机制探讨

目前，为什么有些SV-LAAOs抑制血小板聚集，有些SV-LAAOs却诱导血小板聚集尚不十分清楚。但可肯定的是其作用在很大程度上与SV-LAAO氧化产生的H2O2相关，因为去除H2O2可以降低或消除该效应［7］。LAAOs抑制血小板聚集可能是因为H2O2干扰了GPIIb/IIIa和血纤维蛋白原间的相互激活［1，6］。LAAOs 诱导血小板聚集可 能是 因为H2O2促进了血栓烷的合成［38］，进而引发血小板聚集。

SV-LAAO氧化产生的H2O2不是影响血小板作用唯一因素，其也可能通过与血小板表面受体、通过受体依赖通路激活血小板而发挥效应，SV-LAAO也可能通过未知作用机制影响血小板功能。SV-LAAO对血小板确切作用机制研究，将有助于阐明血小板聚集机理，为SV-LAAO在心血管疾病治疗的临床应用提供基础实验依据。

3.2 SV-LAAO诱导细胞凋亡

细胞凋亡是由基因控制自发的程序性细胞死亡过程，对正常组织的发生发展和机体内环境稳定起重要作用。血管新生是肿瘤得以持续生长的必要条件，而血管内皮细胞的增殖、迁移和分化是血管生成的中心环节。许多SV-LAAOs具有诱导细胞凋亡的作用，能够通过诱导血管内皮细胞凋亡，进而抑制血管生成，因此SV-LAAO被应用于肿瘤研究和肿瘤治疗，成为研究热点［39-45］。

Araki等首次报道出血性蛇毒可诱导血管内皮细胞凋亡，但没有指出其活性组分。不久，Suhr和Torii证实LAAO是蛇毒诱导细胞凋亡的重要因子。随后，陆续有研究者报道SV-LAAO可导致人脐静脉内皮细胞/鼠内皮细胞KN-3的染色质发生凝聚、断裂、诱导血管内皮细胞、人胚胎肾细胞、人骨髓性白血病细胞、小鼠淋巴细胞、人单核细胞MM6、人肺癌上皮细胞A549、人类T细胞MOLT-4、HL-60细胞和K562 细胞凋亡［20，23，32］。

一般研究认为:由SV-LAAO催化产生的H2O2在其诱导细胞凋亡中起重要作用。catalase的加入、H2O2浓度降低或去除后，多种蛇毒LAAOs诱导细胞凋亡的功能均降低或消除［17，20，46］;产生的 H2O2在低浓度时，表现为诱导细胞凋亡，在高浓度时引起细胞坏死。SV-LAAO诱导细胞凋亡方式巧妙，首先结合在细胞表面，在局部区域产生较高浓度的H2O2，通过诱导靶细胞氧化压力引起细胞凋亡。这一细胞凋亡机制经过荧光检测实验确证，并具有一定膜依赖性，因为膜抗氧化剂 trolox可抑制 SVLAAO诱导细胞凋亡，而水溶性抗氧化剂lascorbate却不能抑制其诱导细胞凋亡［23］。但SV-LAAO和外源性H2O2诱导凋亡作用机制明显不同:1)用两者处理细胞后，细胞表现出的形态变化不同;2)抗氧化剂或自由基清除剂能阻止LAAO诱导的细胞凋亡，但不能阻止外源性H2O2诱导的细胞凋亡。很明显，SV-LAAO诱导细胞凋亡不单独依赖反应产生的H2O2。Agkistrodon acutus蛇毒LAAO通过产生的活性氧、激活凋亡蛋白酶-3、-8，而诱导Hela细胞凋亡［21］，Alves 等［22］也发现 Bothrops atrox 蛇毒 LAAO通过激活凋亡蛋白酶-3、-8诱导癌细胞凋亡，因此SV-LAAO也可能通过死亡受体途径、线粒体途径及H2O2途径共同诱导细胞凋亡。

SV-LAAO抗肿瘤作用研究尚在起步，其可能通过在氧化反应过程中产生的H2O2而激发活性氧损害内皮细胞、或通过诱导血管内皮细胞凋亡、或通过影响凋亡相关基因/蛋白水平或抑制血小板聚集途径达到抗肿瘤作用［28，46-48］。但毋庸置疑，SV-LAAO诱导肿瘤细胞凋亡作用明显，且作用机制独特，其成为潜在新型抗肿瘤药物研发价值巨大。

3.3 SV-LAAO细胞毒作用

SV-LAAOs具有明显的细胞毒性作用:1)Bothrops pauloensi蛇毒 LAAO 对 SKBR-3、Jurkat和 EAT细胞株产生剂量依赖型细胞毒作用［1］;2)Korean LAAO对L1210、人 T细胞白血病细胞MOLT-4、人造血干细胞RP-MI1788、人早幼粒细胞白血病细胞HL-60、鼠脾细胞及卵巢癌细胞Hela等细胞系都有毒性作用，只是不同种属细胞对其敏感性不同;3)眼镜王蛇毒LAAO对胃癌CRL5971和黑色素瘤B16细胞呈现明显毒性，并抑制细胞的黏附及增殖能力;4)竹叶青蛇毒LAAO对人T细胞白血病C8166细胞有明显毒性作用，并呈剂量相关性［13］;5)广西眼镜王蛇毒LAAO则对人鼻咽癌细胞系CNE-2、人舌癌细胞系TCA-8113、人肝癌细胞系Bel-7404及人腭部小涎腺腺样囊性癌细胞系NACC有毒性作用［39］;6)BF-LAAO对人脐静脉内皮细胞也具有一定的细胞毒性。SV-LAAOs的细胞毒性作用与其催化产生的H2O2相关，catalase的加入可抑制其对细胞的毒性［28］;SV-LAAOs的细胞毒性作用也可能与其在细胞表面局部产生H2O2，进而干扰了细胞代谢活动有关［1，25］。

3.4 SV-LAAO 抗菌活性

微生物易对抑菌剂产生抗性，使由细菌感染引起的疾病治疗变得困难。SV-LAAO是有效抗菌消炎物质，并对微生物治疗不产生抗药性，可潜在替代市场上的ceftazidine(头孢他啶)和chloramhenicol(氯霉素)类药物［11，29，49］。

Bothrops pauloensis［1］，Bothrops jararaca［8］，Trimeresurus jerdoni I［11］，Trimeresurus mucrosquamatus［13］，Naja naja oxiana［18］，Crotalus durissus cascavella［25］，Bothrops moojeni［26］，Agkistrodon halys Pallas［32］，Vipera lebetina［37］，Bothrops marajoensis［50］和Bothrops atrox［51］蛇毒 LAAOs 具有抑菌活性，但抑菌选择性差异较大。Pseudechis australis蛇毒LAAO，DRS-LAAO，Trimeresurus mucrosquamatus LAAO 和Casca LAAO［25］均可抑制革兰氏阳性和革兰氏阴性菌的生长;江浙蝮蛇毒LAAO对4个真菌亚门的真菌和大肠杆菌的生长抑制作用明显［32］。我们采用平板纸片琼脂法发现Akbu-LAAO特异性抑制金黄色葡萄球菌的生长，剂量效应明显，而对大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌等无抑菌效果;定量分析表明，Akbu-LAAO的抑菌效果是相同条件下头孢类药物剂效的18 倍［29］。

SV-LAAO的抗菌活性与其催化产生的H2O2相关，其抗菌活性可被catalase消除。尽管SV-LAAO氧化反应释放的H2O2达不到抑制细菌生长所需浓度，但由于其结合在细菌表面，从而在细菌表面局部产生较高浓度的H2O2直接作用于细菌，因此少量SV-LAAOs就能明显抑制细菌生长［52，53］。SV-LAAO抗菌作用的选择性，与不同SV-LAAO对不同细菌有不同的结合能力相关，即与不同SV-LAAO可能具有的特殊分子结构或不同微生物个体具有不同细胞外围结构导致二者结合差异相关。微生物对活性氧敏感性比人正常组织要高好多倍，加之SV-LAAO对增生的病原微生物毒性很强，而对宿主细胞和正常的微生物菌群毒性很小［54］，因此可利用SV-LAAO选择毒性靶向治疗疾病。有的SV-LAAO与细菌细胞膜表面的结合在其抗菌活性过程中似乎起不到重要作用，其催化产生的H2O2可诱导细菌细胞膜破裂，致使细胞质内容物流出，以致细菌死亡［25］。另外，SV-LAAO糖链对其抗菌活性也有一定促进作用。因此，不同的SV-LAAO的抑菌可能通过以上作用机制中的一种或几种作用的协同。尽管SV-LAAO抑菌详细机理尚不清楚，但可肯定的是其催化产生的H2O2对其抑菌起重要作用:H2O2可诱导靶细胞的氧化压力，使细胞膜破裂、内容物流出、导致细菌死亡，从而发挥抑菌作用。

3.5 SV-LAAO其它生物学活性

除以上研究较多的生物活性外，SV-LAAO还具有刺激水肿形成、诱导出血或溶血、抗病毒、抗寄生虫和抗HIV活性等生理作用。

3.5.1 SV-LAAO 与水肿

给老鼠注射Eristocophis macmahoni蛇毒LAAO可刺激水肿形成［17］。Wei等报道SV-LAAO可通过损害内皮细胞和肺上皮细胞，使血管通透性迅速增加，诱导肺出血和肺水肿;被毒蛇咬伤后，伤者病理学改变主要是红细胞和白细胞增高，局部迅速红肿、呼吸困难，这种现象可能就与LAAO引起肺部损伤有关［28］。事实上，SV-LAAO也参与蛇伤后引起的炎症过程，可刺激淋巴细胞和单核细胞释放促炎细胞因子 IL-6，IL-2 和 IL-12［42］。

3.5.2 SV-LAAO 诱导出血或溶血

Agkistrodon contortrix laticinctus蛇毒LAAO可诱导老鼠出血，最小剂量为10 μg。Eristocophis macmahoni和Bothrops jararaca LAAOs对鼠和羊呈现一定溶血活性;随着catalase的加入，LAAO的溶血活性消失，说明SV-LAAO催化产生的H2O2在其诱导的溶血过程中起重要作用［8，17］。

3.5.3 SV-LAAO 抗 HIV/病毒活性

Trimeresurus stejnegeri［15］，Bothrops moojeni［24］和Calloselasma rhodostoma LAAOs［26］都具有抗 HIV 活性;Trimeresurus stejnegeri LAAO可剂量依赖地抑制HIV病毒的感染和复制，catalase的加入可使其活性降低15倍［15］。而相同条件下，外源H2O2不具有抗HIV活性，这说明SV-LAAO的这种抗病毒活性与H2O2的产生相关，但不是唯一作用机制。

3.5.4 SV-LAAO 抗寄生虫活性

SV-LAAOs还具有抗寄生虫活性，Bothrops pirajai［6］，Bothrops moojeni［24］，Bothrops jararaca，Bothrops pauloensis［25］和 Crotalus durissus cascavella［32］蛇 毒LAAOs都具有抗利什曼原虫的活性，它们通过抑制利什曼原虫的鞭毛运动来显示疗效。SV-LAAO抗利什曼原虫活性需要培养基中氨基酸存在，catalase可消除这种效应，说明H2O2在SV-LAAO该活性发挥中起重要作用，且需相对较高浓度的H2O2来杀死利什曼原虫细胞［50，51］。基于这些发现，我们不难预测如果将SV-LAAO开发为治疗利什曼原虫或其它寄生虫引起疾病的有效药物，将具有很高的临床应用前景。

4 展望

本文主要综述了近10年来在SV-LAAO的酶学性质、结构特性、生物学功能及其作用机制方面的研究进展。重点阐述了SV-LAAO在调控血小板聚集、刺激水肿形成、诱导出血或溶血、抗病毒、抗菌消炎、诱导细胞凋亡、抗病毒/HIV活性以及抗寄生虫活性等领域的研究进展，并对其相应作用机制进行了深入的总结和探讨。

作为一类其生物学活性得到重新挖掘和备受青睐的物质，SV-LAAO由于其有效的生物学活性和独特且“神秘”的作用机制，有望开发成为新型治疗心脑血管疾病、抑菌消炎、抗肿瘤、抗寄生虫和抗病毒/HIV药物，并且其药效更强、毒性更低、副反应更小。SV-LAAO在基础理论和临床应用研究领域的重要意义值得深入研究和探索。

1 Rodrigues RS，et al.Structural and functional properties of Bp-LAAO，a new L-amino acid oxidase isolated from Bothrops pauloensis snake venom.Biochimie，2009，91:490-501.

2 Doley R，Kini RM.Protein complexes in snake venom.Cell Mol Life Sci，2009，66:2851-2871.

3 Mandal S，Bhattacharyya D.Two L-amino acid oxidase isoenzymes from Russell's viper(Daboia russelli russelli)venom with different mechanisms of inhibition by substrate analogs.FEBS J，2008，275:2078-2095.

4 Lomonte B，et al.Snake venomics and antivenomics of the arboreal neotropical pitvipers Bothriechis lateralis and Bothriechis schlegelii.J Proteome Res，2008，7:2445-2457.

5 De Vieira Santos MM，et al.Antitumoural effect of an L-amino acid oxidase isolated from Bothrops jararaca snake venom.Basic Clin Pharmacol Toxicol，2008，102:533-542.

6 Izidoro LF，et al.Biochemical and functional characterization of an L-amino acid oxidase isolated from Bothrops pirajai snake venom.Bioorgan Med Chem，2006，14:7034-7043.

7 Du XY，Clemetson KJ.Snake venom L-amino acid oxidases.Toxicon，2002，40:659-665.

8 Ciscotto P，et al.Antigenic，microbicidal and antiparasitic properties of an L-amino acid oxidase isolated from Bothrops jararaca snake venom.Toxicon，2009，53:330-341.

9 Sant'Ana CD，et al.Antiviral and antiparasite properties of an L-amino acid oxidase from the snake Bothrops jararaca:cloning and identification of a complete cDNA sequence.Biochem Pharmacol，2008，76:279-288.

10 Sakurai Y，et al.Inhibition of human platelet aggregation by L-amino acid oxidase purified from Naja naja kaouthia venom.Toxicon，2001，39:1827-1833.

11 Lu QM，et al.L-amino acid oxidase from Trimeresurus jerdonii snake venom:purification，characterization，platelet aggregation-inducing and antibacterial effects.J Nat Toxins，2002，11:345-352.

12 Sakurai Y，et al.Anticoagulant activity of M-LAO，L-amino acid oxidase purified from Agkistrodon halys blomhoffii，through selective inhibition of factor IX.Biochim Biophys Acta，2003，1649:51-57.

13 Wei JF(魏继福)，et al.Purification，characterization and biological activity of an L-amino acid oxidase from Trimeresurus mucrosquamatus venom.Acta Bioch Bioph Sin(生物化学与生物物理学报)，2003，35:219-224.

14 Stabeli RG，et al.Platelet aggregation and antibacterial effects of an l-amino acid oxidase purified from Bothrops alternatus snake venom.Bioorgan Med Chem，2004，12:2881-2886.

15 Zhang YJ，et al.Molecular characterization of Trimeresurus stejnegeri venom L-amino acid oxidase with potential anti-HIV activity.Biochem Biophys Res Co，2003，309:598-604.

16 Wei XL，et al.Purification，characterization and potent lung lesion activity of an L-amino acid oxidase from Agkistrodon blomhoffii ussurensis snake venom.Toxicon，2007，50:1126-1139.

17 Ali SA，et al.Isolation，structural and functional characterization of an apoptosis-inducing L-amino acid oxidase from leafnosed viper(Eristocophis macmahoni)snake venom.Arch Biochem Biophys，2000，384:216-226.

18 Samel M，et al.L-Amino acid oxidase from Naja naja oxiana venom.Comp Biochem Phys B，2008，149:572-580.

19 Huang JJ(黄剑钧)，Xu YL(许云禄).The Research of L-amino acid oxidase in snake venom.World J Tumor(世界肿瘤杂志)，2009，8:91-95.

20 Samel M，et al.Isolation and characterization of an apoptotic and platelet aggregation inhibiting L-amino acid oxidase from Vipera berus berus(common viper)venom.Biochim Biophys Acta，2006，1764:707-714.

21 Zhang L，Wu WT.Isolation and characterization of ACTX-6:a cytotoxic L-amino acid oxidase from Agkistrodon acutus snake venom.Nat Prod Res，2008，22:554-563.

22 Alves RM，et al.Evidence of caspase-mediated apoptosis induced by l-amino acid oxidase isolated from Bothrops atrox snake venom.Comp Biochem Phys A，2008，151:542-550.

23 Torii S，et al.Molecular cloning and functional analysis of apoxin I，a snake venom-derived apoptosis-inducing factor with L-amino acid oxidase activity.Biochem，2000，39:3197-3205.

24 Stabeli RG，et al.Cytotoxic L-amino acid oxidase from Bothrops moojeni:biochemical and functional characterization.Int J Biol Macromol，2007，41:132 – 140.

25 Toyama MH，Daniela de O.Toyama，Luiz F.D Passero，et al.Isolation of a new L-amino acid oxidase from Crotalus durissus cascavella venom.Toxicon，2006，47:47-57.

26 Moustafa IM，et al.Crystal structure of LAAO from Calloselasma rhodostoma with an L-phenylalanine substrate:insights into structure and mechanism.J Mol Biol，2006，364:991-1002.

27 Silva EF，et al.Biochemical properties of an L-amino acid oxidase from Bothrops leucurus(white-tailed jararaca)snake venom.Comp Biochem Phys A，2007，148:S105.

28 Wei JF，et al.Purification，characterization and biological activities of the L-amino acid oxidase from Bungarus fasciatus snake venom.Toxicon，2009，54:262-271.

29 Sun MZ，et al.Biochemical，functional and structural characterization of Akbu-LAAO:A novel snake venom L-amino acid oxidase from Agkistrodon blomhoffii ussurensis.Biochimie，2010，92:343-349.

30 Franca SC，et al.Molecular approaches for structural characterization of Bothrops moojeni L-amino acid oxidases with antiprotozoal activity:cDNA cloning，comparative sequence analysis，and molecular modeling.Biochem Bioph Res Co，2007，355:302-306.

31 Geyer A，et al.Structure and characterization of the glycan moiety of L-amino acid oxidase from the Malayan pit viper Calloselasma rhodostoma.Eur J Biochem，2001，268:4044-4053.

32 Liu JW(刘杰武)，et al.Purification and characterization of L-amino acid oxidase from Agkistrodon halys pallas venom.Acta Bioch Bioph Sin(生物化学与生物物理学报)，2002，S4:305-310.

33 Liu S，et al.A novel plasminogen activator from Agkistrodon blomhoffii Ussurensis venom(ABUSV-PA):purification and characterization.Biochem Bioph Res Co，2006，348:1279-1287.

34 Liu S，et al.A novel serine protease from the snake venom of Agkistrodon blomhoffii ussurensis.Toxicon，2008，52:760-768.

35 Sun MZ，et al.Characterization of a fibrinolytic enzyme(ussurenase)from Agkistrodon blomhoffii Ussurensis snake venom:insights into the effects of Ca2+on function and structure.Biochim Biophys Acta，2006，176:1340-1348.

36 Sun MZ，et al.A novel phospholipase A2from Agkistrodon blomhoffii ussurensis venom:purification，proteomic，functional and structural characterizations.Biochimie，2009，91:558-567.

37 Tonismagi K，et al.L-amino acid oxidase from Vipera lebetina venom:isolation，characterization，effects on platelets and bacteria.Toxicon，2006，48:227-237.

38 Takatsuka H，et al.Molecular characterization of L-amino acid oxidase from Agkistrodon halys blomhoffii with special reference to platelet aggregation.Biochim Biophys Acta，2001，1544:267-277.

39 Huang HK(黄红坤)，et al.Study of apoptosis of human palatal salivary gland of adenoid cystic carcinoma induced by L-amino acid oxidase of king cobra.J Guangxi Med Univ(广西医科大学学报)，2006，23:22-25.

40 Zhang YJ(张玉洁)，et al.Purification，characterization of a novel amino-acid oxidase from Trimeresurus stejneger venom.Nat Prod Res Dev(天然产物研究与开发)，2006，18:33-37.

41 Wei JF(魏继福)，et al.The apoptosis of HUVCE cell line induced by L-amino acid oxidase from snake of Bungarus fasciams.Chin J Pathophysiol(中国病理生理杂志)，2006，22:251-256.

42 Wei XL(魏晓龙)，et al.Acute lung injury induced by L-amino acid oxidase purified from Agkistrodon blomhoffii ussurensis venom.J Fourth Mil Med Univ(第四军医大学学报)，2006，27:2096-2099.

43 Sun LK，et al.Apoptotic effect in the glioma cells induced by specific protein extracted from Okinawa Habu(Trimeresurus flavoviridis)venom in relation to oxidative stress.Toxicol In Vitro，2003，17:169-177.

44 Toninello A，et al.Amine oxidases in apoptosis and cancer.Biochim Biophys Acta，2006，1765:1-13.

45 Zhang L，Cui L.A cytotoxin isolated from Agkistrodon acutus snake venom induces apoptosis via Fas pathway in A549 cells.Toxicol In Vitro，2007，21:1095-1103.

46 Deolindo P，et al.L-Amino acid oxidase activity present in fractions of Bothrops jararaca venom is responsible for the induction of programmed cell death in Trypanosoma cruzi.Toxicon，2010，56:944-955.

47 Chen X，et al.Apoptosis of human hepatocellular carcinoma cell(HepG2)induced by cardiotoxin III through S-phase arrest.Exp Toxicol Pathol，2009，61:307-315.

48 Kanzawa N，et al.Achacin induces cell death in HeLa cells through two different mechanisms.Arch Biochem Biophys，2004，422:103-109.

49 Barbosa PS，et al.Renal and antibacterial effects induced by myotoxin I and II isolated from Bothrops jararacussu venom.Toxicon，2005，46:376-386.

50 Alba Fabiola Costa Torres，et al.Antibacterial and antiparasitic effects of Bothrops marajoensis venom and its fractions:Phospholipase A2and L-amino acid oxidase.Toxicon，2010，55:795-804.

51 Raquel de Melo Alves Paiva，et al.Cell cycle arrest evidence，parasiticidal and bactericidal properties induced by L-amino acid oxidase from Bothrops atrox snake venom.Biochimie，2011，93:941-947.

52 Zhang H，et al.Hydrogen peroxide produced by two amino acid oxidases mediates antibacterial actions.J Microbiol，2004，42:336-339.

53 Lee ML，et al.Antibacterial action of a heat-stable form of L-amino acid oxidase isolated from king cobra(Ophiophagus hannah)venom.Comp Biochem Phys C，2011，153:237-242.

54 Sorg O.Oxidative stress:A theoretical model or a biological reality?CR Biol，2004，327:649-662.