庞钰莹，岳文斌，于雪静，李鹏飞，孟金柱，刘岩，李晓明，黄洋，任有蛇，吕丽华

（1．山西农业大学 动物科技学院，山西 太谷030801；2．山西农业大学 生命科学学院，山西 太谷030801）

绵羊卵巢卵泡从原始卵泡形成开始就进入了一个卵泡生长与闭锁相交织的过程，这一过程贯穿雌性动物繁殖的始终。而卵泡的生长和排卵需要颗粒细胞正常的生长增殖和功能表达，这有利于卵母细胞的成熟［1～3］，在这个过程中，FSH和胰岛素是促进颗粒细胞增殖和发挥生理功能的重要因子［4］。

本试验通过对无血清条件下绵羊卵巢卵泡颗粒细胞的体外培养，研究不同浓度的FSH和胰岛素对颗粒细胞增生及雌激素分泌的影响，在研究中排除了血清中未知因素干扰，确定了绵羊卵巢卵泡颗粒细胞体外培养最适宜的FSH和胰岛素浓度，为雌性动物卵巢功能的检测、卵巢疾病引起的不孕症治疗以及动物生殖提供新的理论基础。

1 材料与方法

1．1 材料

选取清徐县屠宰场成年健康母羊作为研究对象，动物宰杀后采集卵巢。

MEM 培养液、牛血清蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA）、两性霉素 B（Fungizone）、4－羟乙基哌嗪乙磺酸（4－（2－hydroxyerhyl）piperazine－1－erhaesulfonic acid，HEPS）、非必需氨基酸、转铁蛋白、雄激素、胰岛素样生长因子（Independent Games Festival，IGF）、胰岛素、促卵泡素（folliclestimulating hormone，FSH）、台盼蓝、氢氧化钠、Sheep Estradiol Elisa kit、双抗等。

1．2 方法

1．2．1 体外培养试验器具的处理

试验所用玻璃器皿、胶塞和塑料制品，必须经严格的酸碱处理程序后，最后用自来水和双蒸水各冲洗3次，烘干后待用。

1．2．2 颗粒细胞的收集

从灭菌的DPBS中取出卵巢，冲洗干净，用眼科剪剪取卵泡，放入4℃无菌的培养液中，置于超净台。……