陈佳宁，郭 晶，李旭勇，陈化兰

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨 150001）

禽流感病毒NS2蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

陈佳宁，郭 晶，李旭勇，陈化兰*

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨 150001）

为制备禽流感病毒(AIV）NS2蛋白的多克隆抗体，本研究将人工合成的NS2基因克隆至表达载体pET-28a中，转化大肠杆菌BL21(DE3），经IPTG诱导表达His-NS2重组蛋白。SDS-PAGE和western blot试验表明，该重组蛋白获得大量表达，可溶性高，并且具有较好的反应原性。将纯化后的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体，并通过间接ELISA检测其效价达1∶20 000以上。Western blot和间接免疫荧光试验显示，多克隆抗体能够与NS2蛋白特异性结合。

禽流感病毒；NS2蛋白；原核表达；多克隆抗体

禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类烈性传染病，严重影响养禽业的发展。自2003年以来已有60多个国家和地区爆发禽流感。近年来，由于禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV）的抗原漂移，该病毒已跨越种间屏障，威胁人类的健康。WHO公布数据显示，人感染禽流感病例已达到600例，病死率近60%。

目前，对于AIV的遗传演化[1]、分子致病机制[2-3]、分子水平传播机制[4]等方面的研究已取得了一定进展，但关于病毒蛋白与宿主相互作用方面仍未得到充分阐述。与其它RNA病毒不同，AIV在感染细胞的细胞核内复制，新合成的vRNP只有从细胞核转运到细胞质才能完成下一步的病毒组装[5-7]。而AIV的基质蛋白M1和核输出蛋白NS2在这一步起到关键作用[8-9]，vRNP、M1、NS2和CRM1形成出核复合体协助vRNP出核。……