朱天辉，李姝江，韩 珊，谯天敏

(四川农业大学林学院，四川 雅安 625014)

撑×绿杂交竹是以撑蒿竹为母本(Bambusa pervaiabilis Mc-Clure)，大绿竹(Dendrocalamopsis daii Keng f.)为父本，通过人工授粉，经过多年研究而培育筛选出的新竹种，1993年被列为林业部(局)100项重点成果推广之一。南方地区已大量栽培，特别在长江中上游地区生态建设中，四川于1999年从广西大规模引种该竹以满足造纸业和退耕还林的需求。但近年来杂交竹出现大面积枯死，造成巨大经济损失，极大地威胁着长江中上游地区退耕还林的进程和生态屏障的建设，目前已证实导致杂交竹枯死的病原为暗孢节菱孢菌［Arthrinium phaeospermum(Corda)M.B.Ellis］［1］，其产生的毒素是病害发生的主要致病因子，该毒素由蛋白类［2］和非蛋类［3］物质组成，其毒理作用作者已进行了深入探索，但对毒素物质的快速检测尚无研究。本文在纯化杂交竹梢枯病菌蛋白毒素基础上，用A蛋白双抗夹心法对其进行标记试验，为该毒素结合位点研究提供检验技术。

1 材料与方法

1.1 材料

病株汁液:发病杂交竹榨取液。

毒素发酵液:以改进Fries为基础培养基，定量接种在PDA平板上培养的暗孢节菱孢菌丝块(5 mm·100 mL－1)，26 °C，140 r·min－1震荡培养 15 d，双层纱布过滤后，取其滤液备用。

毒素蛋白及其抗血清:上述毒素发酵液经旋转蒸发仪(40℃)浓缩、硫酸铵分级沉淀［4］，结合低压层析分离系统［5］和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳［6］方法纯化获得纯蛋白组分(毒素)，采用常规方法免疫新西兰大白兔［7］，即经两次基础免疫［背部皮下、皮内多点注射2 mL乳剂(含0.5 mL 30 μg·mL－1Ap-毒素蛋白)］和3次强化免疫(静脉注射，用量同基础免疫)后，颈动脉采血，获得毒素的抗血清。……