甜菜夜蛾P450基因的克隆及组织特异性分析
2012-09-07郑笑笑赵丽娜王世贵党向利张秋伶
郑笑笑,魏 苹,赵丽娜,王世贵,党向利,张秋伶,唐 斌
(1.杭州师范大学生命与环境科学学院,浙江杭州310036;2.浙江省亚热带作物研究所,浙江温州325005;3.北京市农业广播电视学校平谷分校,北京101200)
甜菜夜蛾P450基因的克隆及组织特异性分析
郑笑笑1,魏 苹1,赵丽娜1,王世贵1,党向利2,张秋伶3,唐 斌1
(1.杭州师范大学生命与环境科学学院,浙江杭州310036;2.浙江省亚热带作物研究所,浙江温州325005;3.北京市农业广播电视学校平谷分校,北京101200)
为获得甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)P450基因序列并分析其分布的组织特异性,采用同源克隆结合RACE技术克隆得到了该基因的cDNA全序列:全长2 565 bp,包含1 010 bp的3′非编码区域和42 bp的5’非编码区域,开放阅读框(ORF)长1 515 bp,编码504个氨基酸,分子量为57.74 kD,理论等电点为8.01;包含2个糖基化位点,2~21 aa为跨膜结构.同源比对结果表明,SeP450与其它昆虫的P450基因拥有同样的2个保守结构域:CAFG、AG\ET.SeP450与棉铃虫蛾Helicoverpa armigera P 450同源性最高,达74%;系统发育分析也表明二者亲缘关系较近.同时RT-PCR结果显示SeP450mRNA在中肠、脂肪体等多种组织中都有表达,其中中肠表达量最高.
甜菜夜蛾;细胞色素P450;基因克隆;序列分析
细胞色素P450广泛分布于不同生物中,从原始的细菌到高度发达的哺乳类体内均有,并参与多种代谢反应[1].P450酶系是一类分子量在46~60 k Da[2]的蛋白质,它们的结构和性质类似[3].研究发现,来源于不同种或同种不同品系、甚至是同一品系不同组织的P450,其在分子量、光谱特征、分布特征、免疫性质、氨基酸序列、调控机制及底物专一性等方面都是不尽相同的[4],这种多样性使生物……
