马桂霞，曹悦兴，王希信，母锐敏

(1.山东建筑大学市政与环境工程学院，山东 济南 250101;2.济南利民制药有限责任公司，山东 济南 250200)

0 引言

盐酸马尼地平属于二氢吡啶类钙离子拮抗剂，作用持久，有良好的抗高血压效果，本品由日本武田药品工业株式会社开发，于1990年在日本上市，在其生产工艺中，使用了甲醇、乙醇、异丙醇、三氯甲烷和甲苯，按照人用药品注册技术要求国际协调会(ICH) 规定[1－2]，甲醇、三氯甲烷、甲苯为二类溶剂，其限度分别为 0.3%、0.006%、0.089%，乙醇、异丙醇为三类溶剂，其限度分别为0.5%、0.5%，因此对该原料药进行有机溶剂残留检测就显得尤为重要。目前，国内外对盐酸马尼地平中有机残留的具体检测方法鲜有报道。本文通过实验比较了直接进样和顶空进样时有机溶剂的检出情况及不同溶剂对检测的影响，实验表明，采用顶空进样法并以50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液为溶剂时，能同时满足5种有机溶剂的检测要求，且该方法灵敏、可靠，结果准确，可有效用于本品的质量控制。

1 实验部分

1.1 主要实验仪器与试剂

气相色谱仪:Trace GC Ultra(美国热电);顶空进样器(DJ-200型，上海金凯德分析仪器有限公司);盐酸马尼地平样品(济南利民制药有限责任公司);甲醇、乙醇、异丙醇、三氯甲烷、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺(均为分析纯)。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件

色谱条件:色谱柱:SE-54(30m×0.25mm×0.33μm)。载气:氦气，流速:0.8mL/min。进样口温度:250℃;柱温:40℃保持15min，以60℃/min升至250℃，保持5min。检测器:FID，检测器温度:250℃;H2:35mL/min，空气:350mL/min，尾吹气(N2)35mL/min。

1.2.2 进样方法的选择

(1)直接进样法

盐酸马尼地平在一般的溶剂中溶解性较小，选择对盐酸马尼地平溶解性较大的N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，进行相应实验如下:

图1 以N，N-二甲基甲酰胺为溶剂直接进样法气相色谱图

以N，N-二甲基甲酰胺为溶剂分别制得每1mL中含甲醇 0.3mg、乙醇 0.5mg、异丙醇 0.5mg、三氯甲烷0.006mg、甲苯0.089mg的溶液，作为对照品溶液，准确量取1μL，进样，记录色谱图，色谱图见图1。由色谱图可知，甲醇、乙醇、异丙醇、甲苯均可顺利检出(S/N＞400，S/N为信噪比，指被测定物能够准确定量的最小浓度为定量限度，一般取信噪比为10∶1[1－2]。)，分离度良好，三氯甲烷峰面积较小(S/N=8.202)，达不到定量限水平，所以直接进样方法不符合要求。因此，拟采用顶空气相色谱法进行本品有机溶剂的检测。

(2)顶空进样法

为试验顶空进样法的适用性，本实验采用顶空瓶温度90℃，样品瓶平衡时间30min的预试验并进行相应的溶剂选择试验。

①取1.2.2(1)中对照品溶液 5.0mL，置 20mL顶空进样瓶中，密封后在90℃恒温加热30min，取1mL，进样，记录色谱图，由色谱图可知，甲醇、乙醇、异丙醇、甲苯均可顺利检出(S/N＞100)，分离度良好，三氯甲烷峰面积较小(S/N=1.171)，达不到定量限水平，因此N，N-二甲基甲酰胺为溶剂不符合要求。

②拟在N，N-二甲基甲酰胺中加入适量水，可以减少有机物在有机相中的溶解度，增大其在顶空气体中的含量，从而提高检测限。通过相应的溶解性试验证明，盐酸马尼地平在50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液中溶解度可达到0.1g/mL，且放置至室温不析出，因此本实验采用50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液进行相应试验。

图2 以50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液为溶剂顶空进样法气相色谱图

以50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液为溶剂分别制得每1mL中含甲醇0.3mg、乙醇0.5mg、异丙醇0.5mg、三氯甲烷 0.006mg、甲苯 0.089mg 的溶液，作为供试品溶液;精确量取5.0mL，置20mL顶空进样瓶中，密封后在90℃恒温加热30min，取1mL注入气相色谱仪，记录色谱图，色谱图见图2。由色谱图可知，甲醇、乙醇、异丙醇、甲苯均可顺利检出(S/N＞200)，分离度良好，三氯甲烷峰面积明显增加(S/N=91.540)，可以顺利检出，因此 50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液为溶剂符合要求。

1.2.3 进样条件的选择

顶空瓶平衡温度:温度越高，蒸汽压越高，顶空气体的浓度越高，分析灵敏度越高，但会对样品的稳定性和顶空瓶的密封性产生不利的影响，因此在满足灵敏度的条件下，选择较低的平衡温度。考虑到本品采用50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液为溶剂，沸点较高，因此拟采用80～90℃的平衡温度，并进行相应的筛选。

分别取 1.2.2②中的供试品溶液 5.0mL置20mL顶空进样瓶中，密封后在 90℃恒温加热20min、30min、40min; 在 80℃ 恒 温 加 热 20min、30min、40min、50min、60min;在相应的时间点处分别取1mL注入气相色谱仪，记录色谱图，通过峰面积的大小来判断是否达到平衡。结果表明，80℃恒温加热40min时即已达到平衡，90℃恒温加热20～40min时甲醇、乙醇、异丙醇面积基本稳定，但三氯甲烷、甲苯面积一直在增加。因此最终选择的恒温加热温度为80℃，恒温时间为45min。

1.2.4 线性关系实验

精确量取三氯甲烷75.13mg置50mL量瓶中，加50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备溶液a;分别精确称取甲醇、乙醇、异丙醇、甲苯 151.6mg、250.1mg、246.8mg、43.48mg置 50mL 量瓶中，加 50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液适量使溶解，加入储备溶液a 2.0mL，以50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液定容至刻度，摇匀，作为储备溶液b;精确量取为储备溶液 b 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL 置 50mL 量瓶中，加 50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液稀释并定容至刻度，摇匀，作为线性关系用溶液。分别取上述溶液各5.0mL，置20mL顶空进样瓶中，密封后在 80℃恒温加热45min，取1mL注入气相色谱仪，记录色谱图，以峰面积A对浓度C进行线性回归，得回归方程如下:

表1 各溶剂的回归方程及相关系数结果

1.2.5 精密度实验

以50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液为溶剂将线性关系试验储备溶液b稀释10倍，作为供试品溶液。精确量取5.0mL，置20mL顶空进样瓶中，密封后在80℃恒温加热45min，取1mL注入气相色谱仪，记录色谱图，连续测定6次，各有机溶剂测定的RSD分别为甲醇 2.29%、乙醇 2.04%、异丙醇2.17%、三氯甲烷 1.43%、甲苯 1.53%。

1.2.6 回收率测定

储备溶液的制备:以50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液为溶剂分别制得每1mL中含甲醇3.0mg、乙醇5.0mg、异丙醇 5.0mg、三氯甲烷 0.060mg、甲苯0.89mg的溶液，作为储备溶液;精确量取为储备溶液 4.0、5.0、6.0mL 置50mL 量瓶中，加 50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液稀释并定容至刻度，摇匀，分别作为80%、100%、120%的储备溶液。

测定法:称取盐酸马尼地平3份各0.5g，分别置20mL顶空进样瓶中，分别加80%储备溶液5mL置上述顶空进样瓶中，密封后在80℃恒温加热使溶解，放冷至室温，然后在80℃恒温加热45min，取1mL注入气相色谱仪，记录色谱图;另分别称取盐酸马尼地平原料，分别取100%、120%储备溶液及50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液(空白试验)同法操作，记录色谱图。

对照品溶液的测定:取100%的储备溶液5mL置20mL顶空进样瓶中，密封后在80℃恒温加热45min，取1mL注入气相色谱仪，记录色谱图。

按外标法以峰面积分别计算各浓度条件下的测得量与回收率(计算时需扣除空白溶液中的测得量)。各溶剂的回收率数据如表2所示。

表2 各溶剂的准确度试验结果

1.2.7 最低检测限

本方法最低检测浓度分别为甲醇1.52μg/mL、乙醇 1.25μg/mL、异丙醇 0.62μg/mL、三氯甲烷0.30μg/mL、甲苯0.04μg/mL。

2 样品测定

2.1 测定方法

色谱条件:见 1.2.1。

供试品溶液:精确称取盐酸马尼地平0.5g，置20mL顶空进样瓶中，精确量取50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液5mL置上述顶空进样瓶中，密封后在80℃恒温加热使溶解，放冷至室温，然后在80℃恒温加热45min。

对照品溶液:以50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液为溶剂溶解并制得每1mL含甲醇0.3mg、乙醇0.5mg、异丙醇 0.5mg、三氯甲烷 0.006mg、甲苯0.089mg的溶液，精确量取5mL置20mL顶空进样瓶中，密封后在80℃恒温加热45min。

分别取上述溶液各1μL注入气相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算其含量。

2.2 测定结果

称取盐酸马尼地平样品0.5g，按照2.1中方法进行检测，检测结果见表3。

表3 样品的测定

结果表明样品中无上述溶剂的残留。

3 结论

实验表明，采用直接进样法及以N，N-二甲基甲酰胺为溶剂的顶空进样法三氯甲烷均不可有效检出。通过采用50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液为溶剂，减少了有机物在有机相中的溶解度，增大了三氯甲烷在顶空气体中的含量，从而提高检测限，同时通过相应的方法学实验证明本方法可以有效地检测本品的有机溶剂，达到控制本品质量的目的。

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