耿 阳，牟小东，刘 然，边葶苈，廖 敏，周继勇

(浙江大学 农业部动物病毒学重点实验室，杭州 310058)

鸡的传染性支气管炎由传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV）感染引起，是一种高度接触性传染病，IBV可侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统、消化系统及生殖系统等[1]。由于IBV特殊的转录机制导致该病毒容易发生变异，造成的临床特征越来越复杂。目前IBV的变异株广泛分布于世界各地，给养禽业带来严重的经济损失。

传染性支气管炎病毒与引起严重急性呼吸综合症（severe acute respiratory syndrome，SARS）的冠状病毒（SARS-coronary virus, SARS-CoV）同属于冠状病毒科冠状病毒属的成员。这两种病毒具有相似的基因组结构，其基因组编码四种结构蛋白：纤突蛋白（S）、小膜蛋白（E）、膜蛋白（M）、核衣壳蛋白（N）和15或16种非结构蛋白（nonstructural protein），在IBV没有nsp1蛋白[2]。已有的研究表明，冠状病毒的非结构蛋白与病毒的复制、增殖和致病力有关[3-6]。

nsp5是冠状病毒的主要蛋白酶（main protease，Mpro）， 又称 3C样 蛋白酶（3C-like proteinase，3CLpro），对多聚蛋白的水解起关键作用，因此，nsp5成为抗SARS和其他冠状病毒药物研究的重要靶点[7]。目前对IBV非结构蛋白的研究几乎是一片空白，开展IBV非结构蛋白研究对于揭示IBV的致病机制和寻求IBV新的检测方法具有重要意义。本试验利用基因工程技术重组表达了IBV nsp5蛋白，并证实其具有良好的免疫原性和反应原性。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 病毒、细胞及宿主菌 传染性支气管炎病毒SC021202毒株[8]、Sf9细胞、E.coliTOP10、E.coliDH5α、E.coliBL21(DE3)、E.coliDH10Bac由本实验室保存。

1.1.2 载体与试剂 杆状病毒表达载体pFastBac HTA、CellfectinⅡ转染试剂以及TRIzol试剂购自Invitrogen公司；反转录试剂盒购自Fermentas公司；T4 DNA连接酶及限制性核酸内切酶购自TaKaRa公司；……