刘颖，王显国，张巨明＊，刘芳

（1.华南农业大学农学院，广东 广州510642；2.中国农业大学动物科技学院，北京100193；3.全国畜牧总站，北京100193）

山野豌豆（Vicia amoena）又叫落豆秧、高蔓草藤、宿根苕子，为豆科巢菜属多年生草本植物［1］。它表现出耐寒、抗旱、叶量大、粗蛋白及动物必需氨基酸含量高、适应性广、再生力强、容易繁殖、产量高、品质好等优点［2－5］。另外，山野豌豆不仅是一种优良牧草，而且还是很好的防风固沙水保植物［6］、改土肥田绿肥作物［7］和草坪及药用植物［8］，具有推广和应用价值。目前SRAP（sequence related amplified polymorphism）标记已在农作物和园艺作物上有了较多成功的应用，但SRAP在豆科牧草种质资源上的应用还非常少，仅在苜蓿（Medicago）［9－15］、大豆（Glycine）［16－18］、三叶草（Trifolium）［19，20］、山羊豆（Galege）［21］、小扁豆（Lens）［22，23］等属有相关报道。本研究主要采用正交设计法对SRAP－PCR反应条件中主要因子：Mg2＋、dNTP、引物、Taq酶进行优化分析并确定了模板DNA浓度，旨在筛选出一个适用于野豌豆属的稳定性及重复性好，多态性高的最佳反应条件。此外，本研究还对部分SRAP引物组合进行了多态性筛选，希望获得一些多态性丰富的SRAP引物组合，为开展SRAP标记技术在山野豌豆种质鉴定、遗传多样性等方面的分子生物学研究提供有利依据。

1 材料与方法

1.1 供试材料

试验所用5份山野豌豆材料采自全国3个不同的地域，优化SRAP－PCR体系的DNA模板来自内蒙古呼伦贝尔的9号、山西五台山的6号及北京百花山的14号DNA；筛选引物所用DNA模板来自山西沁源的11号、北京灵山的5号及内蒙古呼伦贝尔的9号DNA。

1.2 试验设计与方法

1.2.1 PCR反应体系设计与引物组合 采用L9（34）正交试验设计，对 Mg2＋、dNTP、引物、Taq DNA 聚合酶进行4因素3水平筛选（表1）。……