王 惠，郭 峰，关 超，张 梅，关 萍＊，白洪志

（1.沈阳农业大学生物科学技术学院，辽宁沈阳110866；2.沈阳农业大学土地与环境学院，辽宁沈阳110866）

细胞融合（cell fusion），又称细胞杂交，是指在外力的作用下2个或2个以上的细胞融合成一个双核或多核细胞的现象，因此又称细胞杂交。细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒、肿瘤和培育生物新品种的重要手段［1-3］，尤其是近年来发展起来的新研究技术有着更为重大的实践意义［4-7］。细胞融合的方法包括仙台病毒诱导法、物理融合技术（电融合技术）、聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）法等。其中PEG法诱导细胞融合以其容易制备、活性稳定、不需要特别的仪器设备、操作方便等优点，被普遍用于生物、遗传、医药等研究领域［8-9］。但 该 方 法 也 受 许 多 因 素 的 影 响［10-15］，如PEG浓度、融合温度、融合时间等。

本试验选取鸡红细胞、兔红细胞、蟾蜍红细胞作为同源与异源细胞研究的试验材料，从PEG浓度、融合温度、融合时间三个方面进行单因素探索，以期找到融合率最高时的条件，达到更好的融合效果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂 不同浓度的PEG（Mr=4 000）：250、500、750mL／L PEG；380g／L柠檬酸钠；8.5g／L生理盐水；GKN液；Hanks液；750mL／L酒精。

1.1.2 仪器 电子天平，恒温水浴锅，低速离心机，微量移液枪，光学显微镜。

1.2 方法

1.2.1 不同浓度PEG的配制 称取少许PEG（Mr=4 000）放入小烧杯中，沸水浴加热，使其熔化，分别移取等量的3份至刻度试管中，待冷至50℃时，分别加入预热的3倍体积、1倍体积、1／3体积的GKN液，混匀，配成250、500、750mL／L的PEG。

1.2.2 红细胞的采取及细胞悬液的制备 用灭菌的注射器吸入38g／L的柠檬酸钠2mL，从用750 mL／L酒精消过毒的鸡翼静脉处（兔是从耳缘静脉处，蟾蜍是从主动脉弓处）采取静脉血转入事先装有38g／L的柠檬酸钠的烧杯中使柠檬酸钠与血液的体积比为1∶4，放入4℃冰箱中保存。……