孙敏华，董嘉文，吕殿红，周秀蓉，李林林，胡奇林

（广东省农业科学院兽医研究所 广东省公共卫生公共实验室，广东广州510640）

新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的一种严重危害养禽业的急性高度接触性传染病。早在1971年，Higgins D A［1］在香港发现9起鸭新城疫病毒感染的急性病例，并分离出高致病性的NDV。而自2000年后，我国分离鉴定的绝大多数鸭新城疫病毒对鸭的致死率在50%以上，对鸡的致死率可高达100%［2-4］。其中，部分毒株与水禽新城疫病毒关系密切［5］。由于NDV宿主范围广泛，且目前高致病性毒株所占比例大，给养禽业带来了巨大的威胁。

目前，新城疫的确诊主要依靠病毒的分离鉴定，该法准确、特异，但相对费时费力。ELISA方法能进行批量检测、速度快，适合于基层兽医和动物检疫部门使用。1995年，吴红专等研制出新城疫单抗夹心ELISA试剂盒，临床样本的检测结果表明其阳性符合率达100%［6］。也建立了针对甲型H1N1流感病毒及鹿流行性出血病病毒的双抗体夹心ELISA方法［7-8］。鉴于此，本研究制备了抗鸭新城疫病毒单克隆抗体，建立了单抗夹心ELISA方法，为快速诊断鸭新城疫奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物及细胞系 1.5kg清洁级新西兰兔和6周～8周龄Balb／c雌性小鼠购自南方医科大学实验动物中心，骨髓瘤细胞SP2／0由华南农业大学郭霄峰教授惠赠。

1.1.2 试剂 HAT选择培养基、DMEM培养基为Gibco公司产品；HT培养基为Invitrogen公司产品；PEG 1450为Sigma公司产品；蛋白分子量标准Fermentas公司产品；胎牛血清为杭州四季青生物有限公司产品；HRP标记的羊抗鼠二抗为Proteintech公司产品；……