刘山辉 辽宁职业学院,辽宁铁岭 112001

1 试验材料

1.1 试验菌种来源

来源于本地区11家肉种鸡场和商品肉鸡场发病鸡病料分离培养物。

1.2 药品与试剂

（1）革兰氏染液、美蓝染液、微量发酵管（由辽宁检验检疫局检测中心提供）。

（2）致病性大肠杆菌阳性血清购自中国兽药监察所。

（3）抗菌原液：将各种抗菌药物稀释成2mg/ml，中草药稀释成相当于含原生药1g/ml。

（4）中草药组方（每克）

双黄连：金银花：0.4g黄连0.6g

白头翁散：白头翁0.35g黄连0.25g黄柏0.25g秦皮0.15g

三黄加白散：黄连0.35g黄柏0.25g黄岑0.25g白头翁0.15g

苦参合剂：苦参0.6g黄连0.4g鱼腥草粉剂：鱼腥草粉剂1g穿心莲粉剂:穿心莲粉剂1g

1.3 培养基

普通营养琼脂培养基、伊红美兰琼脂培养基、乳糖胆盐肉汤培养基。

1.4 药敏纸片

购自北京天坛药物生物技术开发公司，中草药药敏纸片为自制（相当于含原生药10mg/片）。

1.5 仪器

微量移液器、恒温箱、微生物接种用具。

2 试验步骤

2.1 致病性大肠杆菌的分离与鉴定

2.1.1 菌种的分离

剖检病死鸡，无菌操作采取病死鸡的心血、肝脏病料接种于乳糖胆盐肉汤培养基中进行增菌培养，进一步移接至伊红美兰琼脂培养基，37℃培养24h，挑选典型菌落接种到斜面培养基上，作为试验菌种保存。

2.1.2 生化试验

将试验菌种分别接种于微量发酵管，置灭菌培养皿中37℃培养24～48h，观察发酵情况。在培养48 h后，加入靛基质试剂于蛋白胨水中，检查是否有靛基质生成。

生化试验结果显示，分离的菌种能发酵甘露醇、麦芽糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖、鼠李糖、蕈糖、果糖产酸产气，靛基质试验和M.R试验阳性，山梨醇、鸟氨酸试验结果阳性。……