李继纲梁燕闫见敏郑戌翔孙亚东

（西北农林科技大学园艺学院，陕西杨凌 712100）

1 选育过程

西农2011亲本选育始于2006年，母本R015是以抗番茄黄化曲叶病毒的TY52（Ty-1）与粉色、大果（单果质量250～300 g）、果实硬度高、中晚熟自交系FTI1419A-3经过5代回交转育，育成的抗 TYLCV，大果，生长势旺盛，综合性状优良的自交系。父本 R019是利用引进的抗TYLCV的抗源材料99S-C-39-20-11-24-17-0（Ty-3），经6代回交转育，将抗病基因转育到粉色、大果、早熟、有限生长类型、综合性状良好的 FTD1401A-1自交系中育成的抗TYLCV，大果，早熟的优良自交系。

2009年以R019为父本，以回交转育的FTI1419A-3为母本配制杂交组合25个，通过TYLCV抗性分子标记鉴定，田间抗性鉴定以及果实性状、生长势和综合性状进行综合评价，筛选出优良组合，2009～2011年参加陕西省品种区域试验和生产试验示范，2011年5月通过陕西省农作物品种审定委员会认定。

2 TYLCV抗性分子标记鉴定

2.1 材料

9份番茄试验材料由西北农林科技大学园艺学院番茄育种课题组提供。

2.2 方法

2.2.1 引物 番茄抗黄化曲叶病毒病Ty-1基因的CAPS标记引物参照于力等（2008）的设计，CAPS F：5′-TAATCCGTCGT TACCTCTCCTT-3′；CAPS R：5′-CGGATGACTTCAATAGCAATGA- 3′。Ty-3基因的 SCAR标记引物参照许爽等（2009）的设计，SCAR F：5′-GGTAGTGGAAATGA TGCTGCTC-3′；SCAR R：5′-GCTCTGCCTATTGTCCCATATATAACC-3′。

2.2.2 PCR扩增、酶切体系与电泳检测 DNA提取参照Williamson等（1994）的方法。PCR反应总体系为 25 μmol·L-1，包括：模板 DNA 2.0 μL，10×PCR Buffer 2.0 μL，25 mmol·L-1MgCl22.0 μL，2.5 mmol·L-1dNTPs 2 μL，引物（20 μmol·L-1）各 1 μL，TaqDNA polymarase（5 U·μL-1）0.2 μL，终体积用超纯水加至25 μL。PCR反应程序为：94 ℃预变性5 min，然后94 ℃变性1 min，Ty-1引物64.6 ℃退火，Ty-3引物50 ℃退火1 min，72 ℃延伸90 s，共35个循环，72℃延伸10 min，扩增产物在4 ℃保存。取PCR产物5 μL，于1.5%琼脂糖凝胶电泳，观察结果。酶切体系为扩增产物10 μL加入10 U的TaqI酶1 μL，Buffer 2 μL，终体积用超纯水加至25 μL。65 ℃保温1.5 h。酶切产物于1.8%琼脂糖胶在电压5 V·cm-1条件下电泳1 h，EB染色，Bio-RAD凝胶成像系统拍照。

2.3 结果与分析

2.3.1Ty-1基因CAPS引物扩增和酶切结果 由图1-a可看出1号、2号、3号、4号、5号、KN、22号、46号均扩增出398 bp的特异片段。……