王婷玉，李俊，金芝贵，吴飞华，王小华，周倩（.上海交通大学医学院附属第九人民医院药剂科，上海000；.安徽医科大学药学院，合肥 3003）

来氟米特是病情缓解药，能够延缓类风湿性关节炎（RA）的疾病进展，改善患者症状，提高其生活质量，被广泛用于RA的治疗[1]。来氟米特是一种前体药物，在体内代谢成活性代谢物丙二酸次氮酰胺（A771726），以抑制二氢还原酶阻碍其合成嘧啶，从而抑制RA中淋巴细胞的增殖[2]。CD4+CD25+调节性T淋巴细胞（CD4+CD25+Tregs）是近年发现的一类具有独特免疫功能的细胞群，其以“主动”方式维持自身稳定，在调控外周自身反应性T淋巴细胞中发挥重要作用。本文以刀豆蛋白（ConA）刺激的胶原性关节炎（CIA）模型大鼠脾淋巴细胞为靶细胞，研究A 771726对体外培养的脾淋巴细胞中CD4+CD25+Tregs分化的影响，考察A771726能否通过直接上调CD4+CD25+Tregs从而抑制脾淋巴细胞增殖；再进一步研究A771726诱导CD4+CD25+Tregs分化的作用机制，包括CD4+CD25+Tregs特异性标志物Foxp3的表达以及免疫性细胞因子的分泌。以期深入了解来氟米特抑制淋巴细胞增殖，进而治疗RA的作用机制。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Eclipse TE300型倒置显微镜（日本Nikon公司）；Muliskan MK3酶标仪（上海雷勃分析仪器有限公司）；Bio-RAD Power Pac Basic电泳仪（美国BIO-RAD公司）；FACScan流式细胞仪（美国BD公司）；Applied Biosystems基因扩增仪9700系统（美国Applied Biosystems公司）；GSG2000核酸/蛋白凝胶图像分析管理系统（珠海黑马医学仪器有限公司）。

1.2 试药

A771726原料药（美国欣凯公司上海代表处，批号：080716，纯度：96%）；Ⅱ型胶原（CⅡ，美国Sigma公司，批号：C7806）；小鼠抗大鼠FITC-CD4抗体和小鼠抗大鼠PE-CD25抗体（美国Caltag公司，批号：MR5101、MR6104）；RNA抽提试剂（Trizol）（美国Invitrogen公司，批号：15596-026）；转化生长因子β（TGF-β）酶联免疫（ELISA）试剂盒（上海森雄科技实业有限公司，批号：20080524）；……