李素毅 高健生 接传红 宋剑涛 严 京

(中国中医科学院眼科医院，北京市石景山区鲁谷路33号，100040)

变应性结膜炎(Allergic Conjunctivitis，AC)是最常见的眼表疾病之一，属于中医的“目痒”“痒如虫行症”“时复证”范畴，病情复杂难治。川椒方为高健生主任医师的经验方，临床上取得了良好的疗效。本研究通过建立小鼠变应性结膜炎的动物模型，选择症状学、细胞学和血清免疫学中的较为重要的指标，验证川椒方对变应性结膜炎的治疗作用，并初步探讨其作用机制。

1 材料

1.1 动物 SPF级Balb/c雌性小鼠，6～8周，体重18～20g。(中国医学科学院动物实验中心提供。动物合格证号:SCXK京2009-0007)。

1.2 主要试剂 OVA(美国 Sigma公司，A5503)，Al(OH)3(美国Sigma公司，A4682)，ELISA 试剂盒(美国R＆D公司，CK-E90529M)，川椒方水提液(中药材购自北京燕北药材公司，知母、地肤子、牛蒡子、川芎、川椒、防风等煎煮后取煎液蒸发浓缩)，盐酸奥罗他定滴眼液(爱尔康公司)。

1.3 主要仪器 高速冷冻离心机(日本久保田3740)，病理包埋机(北京海鹰达科技发展公司BMG-011)，病理切片机(德国LEIC-RM2235)，正置式显微镜+图像分析系统(日本OLYMPUS-BX51)，全自动酶标仪(Rayto公司，RT-6000)。

2 方法

2.1 动物模型制备及实验流程 参照Nakamura的AC小鼠模型方法［1］，balb/c小鼠进入动物房适应1周后开始实验。1)致敏阶段:于实验第0天、7天、14天分别给予腹腔注射含OVA100μg与佐剂Al(OH)35mg共200μL的混合物使小鼠致敏。2)局部加强致敏:第15天至21天，每天每眼用OVA400μg溶于生理盐水中点眼以加强致敏。3)激发:第24天将OVA(每眼400μg)溶于pH7.2的PBS液中滴入双眼进行致敏原攻击，以诱导AC症状。4)治疗:第25天开始至31天治疗7天。5)再次激发:7天治疗结束后，再次OVA点眼局部激发……