朱金丽 何 闪 周 秘 修乐山 邢朝斌

(河北联合大学生命科学学院 河北唐山 063000)

刺五加(Eleutherococcus senticosus Harms)根、茎、叶均可入药，是我国传统的珍贵药用植物［1］，具增强免疫功能、抗疲劳、抗衰老、抗辐射等药理活性［2］。刺五加中主要含有三萜类、黄酮类、多糖等成分［3］，其中三萜类化合物均通过依赖甲羟戊酸的类异戊二烯途径合成，鲨烯和2，3－氧化鲨烯是其共同的前体物质［4］。鲨烯合酶(squalene synthase，SS)催化类异戊二烯途径的第一步酶促反应，是三萜类化合物生物合成的关键酶，定位于内质网膜，催化两分子的法呢酰基二磷酸(farnesyldiphosphate，FPP)缩合成为一分子鲨烯［5］。SS基因的过量表达能促进甾醇和三萜类化合物的大量合成［6］。因此SS是此类物质合成中公认的一个限速酶［7］。

Penicillium minioluteum P116－1a是刺五加体内丰富的内生菌之一，该菌可显著提高刺五加中的皂苷含量［8，9］。在刺五加的三萜皂苷生物合成所必须的类异戊二烯途径中，因P．minioluteum P116－1a不能独立合成三萜类化合物［10］，且甾醇类化合物为细胞的必须组分，因此，从甲羟戊酸至鲨烯的酶促反应步骤共存于P．minioluteumP116－1a和其宿主刺五加中，而此后的三萜类合成过程为刺五加所特有。在这些共有的催化酶类中，SS是公认的三萜皂苷合成的限速酶［7］。冯丽玲［11］等发现酿酒酵母的SS可利用青蒿的FPP合成甾醇，抑制其表达后则可促使FPP进入青蒿素合成途径，即一个物种的SS可以催化另一物种的FPP。因此P．minioluteum P116－1aSS也能够催化刺五加FPP的可能性较大，研究其提高宿主刺五加中皂苷含量的作用机制具有重要意义。本文采用self－formed adaptor PCR(SEFA－PCR)染色体步移法对这个基因的DNA序列3＇和5＇端进行了的扩增，为进一步研究P．minioluteum P116－1a SS旁邻序列在刺五加苷生物合成中的作用奠定了基础。……