邵美丽，刘思国，赵燕丽，孔保华

（1.东北农业大学食品学院，哈尔滨 150030；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物细菌病研究室，哈尔滨 150001）

作为四大食源性致病菌之一，单增李斯特菌（Listeria monocytogenes，LM）是食品安全部门重点监管对象之一[1]，其对肉、奶、蛋、水产品及蔬菜等均有不同程度污染[2]，以肉及肉制品污染最严重[3]。故建立肉中单增李斯特菌快速、准确、定量、可靠的检测方法尤为重要。目前肉制品中常见致病菌检测方法操作繁琐、费时费力、灵敏度较低、特异性较差、易产生假阳性且不能准确定量，无法不能满足当今肉品行业发展需求。TaqMan探针实时荧光定量PCR方法具有PCR技术高效性、探针技术高特异性、光谱技术的高敏感性和高精确性等优点，可弥补传统检测方法的不足[4-5]。本研究旨在以单增李斯特菌hlyA基因为对象，建立肉中单增李斯特菌的TaqMan探针实时定量PCR检测方法，以期为提高肉制品监管效率和水平，预防食物中毒和食源性疾病发生奠定基础。

1 材料与方法

1.1 菌种和生肉样品

单增李斯特菌标准株（CMCC54001，CMCC-54002，CMCC54005，CM54006，CM54007），大肠杆菌标准株（ATCC25922），沙门氏菌标准株（CMCC-5217）、志贺氏菌标准株（CMCC51570），结核杆菌标准株（ATCC25177），猪链球菌标准株（ATCC-49619），金黄色葡萄球菌标准株（ATCC259235），均由东北农业大学食品学院提供。新鲜猪肉购于黑龙江省哈尔滨市家乐福超市。

1.2 试剂和仪器

Premix ExTaqTM（Perfect Real time）、梯度PCR仪（宝生物工程大连有限公司）；细菌基因组DNA（小量）抽提试剂盒（上海华舜生物技术有限公司）；Mx3005P荧光定量PCR仪（吉泰生物科技有限公司）。

1.3 引物和探针

根据GenBank收录的单增李……